[發(fā)明專利]一種平歐雜種榛組織培養(yǎng)的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710383113.8
• 申請日: 2017-05-26
• 公開（公告）號: CN107306789A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董文軒;趙萬林;胡愛雙;劉鎮(zhèn)東
• 申請（專利權(quán)）人: 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種平歐雜種榛組織培養(yǎng)的方 法。

背景技術(shù)

在生產(chǎn)中，榛子苗木主要以壓條法繁殖，壓條技術(shù)現(xiàn)已基本成熟。但是 榛樹每年根部新萌出的枝條有限，使得壓條繁殖的系數(shù)比較低，育苗速度較 慢，遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)中對榛苗的大量需求。嫁接繁育時(shí)，苗木產(chǎn)生大量的根 蘗，從而給生產(chǎn)和管理帶來許多不便，所以很少采用。近些年，我國科研工 作者雖然在棒子的扦插和組織培養(yǎng)方而取得了一定進(jìn)展，但在生產(chǎn)上應(yīng)用的 效果并不穩(wěn)定，故而也較少采用。截止目前，還沒有找到一種比壓條更為簡 單而高效的快速繁殖榛苗的方法。

目前，國內(nèi)的榛子組培雖然取得了一些進(jìn)展，但離生產(chǎn)還有一定距離， 目前我國還未建立起適用范圍廣的榛子組培基本培養(yǎng)基，選用的外植體仍局 限于芽、嫩梢、莖段等幼嫩組織，用成苗的器官、組織誘導(dǎo)脫分化的報(bào)道極 少。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種平歐雜種榛組織培養(yǎng)的方法，解決了用于 平歐雜種榛組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基、激素配比，及用于組織培養(yǎng)的單莖段消毒不 合理，進(jìn)而導(dǎo)致平歐雜種榛組織成活率低，培養(yǎng)不易成功的問題。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供了一種平歐雜種榛組織培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：

(1)5月中旬取平歐雜種榛的嫩枝，剪成3～4cm的莖段，作為組織培 養(yǎng)的外植體；

(2)將上述外植體用濃度為70～75體積％的酒精消毒10～30s，再用濃度 為0.08～0.12體積％的HgCl₂消毒6～10min，沖洗后備用；

(3)將上述外植體切成1～2cm長的帶芽單莖段，接種到含有7.5g/L PVP 的初代培養(yǎng)基中進(jìn)行初代培養(yǎng)，得到初代培養(yǎng)的單莖段；

(4)將經(jīng)過初代培養(yǎng)后的單莖段接種到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，所 述增殖培養(yǎng)基為NRM培養(yǎng)基，所述增殖培養(yǎng)基中還含有1.5mg/L的6-BA和0.01mg/L的IBA，得到增殖培養(yǎng)的單莖段；

(5)將增殖培養(yǎng)后的單莖段蘸取1g/L的NAA 10s后扦插到基質(zhì)中。

優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基為NRM培養(yǎng)基。

優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基或增殖培養(yǎng)基中還含有葡萄糖，所述葡萄糖的 濃度為30g/L。

優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基或增殖培養(yǎng)基中還含有N-N′-乙基雙-[2-鄰羥基 苯]-甘氨酸與鐵的螯合物，其濃度為75～150mg/L。

優(yōu)選的，所述基質(zhì)為草碳和河沙以2∶1的重量比混合的混合物。

優(yōu)選的，所述步驟(3)～(5)培養(yǎng)的條件為：溫度控制為21℃～25℃， 光照時(shí)間12～16h，光照強(qiáng)度2000～3000lx。

現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1)以嫩梢、嫩枝和半木質(zhì)化枝條為試材篩選最佳外植體的試驗(yàn)顯示，榛 子組培最佳外植體是春天剛萌發(fā)的嫩枝，帶菌較少，消毒較易，且成活率較 高。

2)NaClO消毒處理的外植體其褐化率顯著高于HgCL₂處理，不適合于本 試驗(yàn)品種的消毒。在防褐化方面，PVP和Vc都能明顯的降低其褐化率，但二 者之間的差異并不顯著，由于Vc極易被氧化，本發(fā)明最終采用每升培養(yǎng)基中 附加7.5gPVP。

3)在以DKW、WPM、NRM和MS為基本培養(yǎng)基時(shí)發(fā)現(xiàn)，促進(jìn)株高伸長 方面，培養(yǎng)基的作用效力是：DKW＞W(wǎng)PM＞NRM＞MS，且DKW培養(yǎng)基上 的苗健壯，不易形成叢生芽或腋芽萌發(fā)；在促進(jìn)芽分化方面，培養(yǎng)基的作用 效力表現(xiàn)為NRM＞DKW＞W(wǎng)PM＞MS，NRM培養(yǎng)基上的芽苗極易產(chǎn)生叢生 芽。故在以增殖為目的是易選擇NRM作為基本培養(yǎng)基，而在以壯苗為目的時(shí)， 易選擇DKW作為基本培養(yǎng)基。

4)對比蔗糖、葡萄糖、果糖和乳糖四種糖作為碳源的試驗(yàn)顯示，四種糖 都能促進(jìn)榛子的生長，但以葡萄糖和果糖的效果較佳，可能是由于其分子量 小，易于吸收造成的，本發(fā)明最終選用每升培養(yǎng)基中附加30g葡萄糖。

5)鐵鹽不僅對榛子芽苗的芽數(shù)和芽長有促進(jìn)作用，而且對榛子葉色影響 很大，缺鐵導(dǎo)致葉片黃化。相比FeEDTA，F(xiàn)e138(有機(jī)螯合鐵)更有利于榛子的 增殖，且當(dāng)添加100mg/L的Fe138時(shí)，榛子芽苗的葉色表現(xiàn)出正常率。