[發(fā)明專利]一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴(kuò)繁方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710383112.3
• 申請(qǐng)日: 2017-05-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107047313A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董文軒;趙萬(wàn)林;胡愛(ài)雙;劉鎮(zhèn)東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴(kuò)繁方法。

背景技術(shù)

在生產(chǎn)中，榛子苗木主要以壓條法繁殖，壓條技術(shù)現(xiàn)已基本成熟。但是榛樹(shù)每年根部新萌出的枝條有限，使得壓條繁殖的系數(shù)比較低，育苗速度較慢，遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)中對(duì)榛苗的大量需求。嫁接繁育時(shí)，苗木產(chǎn)生大量的根蘗，從而給生產(chǎn)和管理帶來(lái)許多不便，所以很少采用。近些年，我國(guó)科研工作者雖然在棒子的扦插和組織培養(yǎng)方而取得了一定進(jìn)展，但在生產(chǎn)上應(yīng)用的效果并不穩(wěn)定，故而也較少采用。截止目前，還沒(méi)有找到一種比壓條更為簡(jiǎn)單而高效的快速繁殖榛苗的方法。

目前，國(guó)內(nèi)的榛子組培雖然取得了一些進(jìn)展，但離生產(chǎn)還有一定距離，目前我國(guó)還未建立起適用范圍廣的榛子組培基本培養(yǎng)基，選用的外植體仍局限于芽、嫩梢、莖段等幼嫩組織，用成苗的器官、組織誘導(dǎo)脫分化的報(bào)道極少。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴(kuò)繁方法，解決了用于平歐雜種榛組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基、激素配比，及用于組織培養(yǎng)的消毒不合理，進(jìn)而導(dǎo)致平歐雜種榛組織成活率低，培養(yǎng)不易成功的問(wèn)題。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供了一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴(kuò)繁方法，包括以下步驟：

(1)取大田栽培的平歐雜種榛嫩葉作為組織培養(yǎng)的外植體；

(2)將上述外植體用濃度為70～75體積％的酒精消毒10～30s，再用濃度為0.08～0.12體積％的HgCl₂消毒5min，沖洗后備用；

(3)將消毒后的外植體剪成長(zhǎng)條狀，接種到含有于含有細(xì)胞生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中，葉片正面朝下放置，黑暗處理14d，得到愈傷組織；

(4)將愈傷組織培養(yǎng)至1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，所述1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中含有0.6mg/L6-BA+0.8mg/L IAA或2mg/L 6-BA+1.4mg/L NAA，誘導(dǎo)時(shí)間為30天，得到平歐雜種榛再生不定芽。

優(yōu)選的，所述細(xì)胞生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的組合為：TDZ 3mg/L+IBA 0.5mg/L，或

TDZ 3mg/L+IBA 0.3mg/L，或

TDZ 2mg/L+IBA 0.5mg/L，或

TDZ 2mg/L+IBA 0.3mg/L，或

TDZ 2mg/L+NAA 0.03mg/L，或

6-BA 2mg/L+NAA 3mg/L，或

2-4，D 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L。

優(yōu)選的，所述1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中還含有30g/L葡萄糖。

優(yōu)選的，所述1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基pH值為5.8。

優(yōu)選的，所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件為：溫度控制為23℃～25℃，光照時(shí)間12～16h，光照強(qiáng)度2000～3000lx。

現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1)葉片愈傷組織，在以光照培養(yǎng)箱內(nèi)水培枝條長(zhǎng)出的葉片，春天大田里剛萌發(fā)的葉片和組培葉片為試材進(jìn)行的試驗(yàn)表明，大田剛萌發(fā)的葉片帶菌少，生命力強(qiáng)，消毒較容易且后期長(zhǎng)勢(shì)較好，最佳的消毒方法是用HgCL₂消毒5min，成活率能達(dá)到52.0％。

2)在以1/2DKW、DKW、改良MS和NRM為基本培養(yǎng)基誘導(dǎo)葉片愈傷時(shí)，1/2DKW和改良MS效果較好，誘導(dǎo)率能達(dá)到100％。葉片反面朝上放置要比正面朝上放置效果佳，黑暗處理有利于愈傷組織的形成，其中以黑暗處理14天，誘導(dǎo)的愈傷形態(tài)最佳。

3)本發(fā)明試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)愈傷組織較適宜的激素組合有TDZ 3mg/L+IBA 0.5mg/L，TDZ 3mg/L+IBA 0.3mg/L，TDZ 2mg/L+IBA 0.5mg/L，TDZ 2mg/L+IBA 0.3mg/L，TDZ 2mg/L+NAA 0.03mg/L，6-BA 2mg/L+NAA 3mg/L，2-4，D 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L，誘導(dǎo)率都能達(dá)到100％，榛子誘導(dǎo)出愈傷組織比較容易。

4)從愈傷組織中誘導(dǎo)不定芽比較困難，目前發(fā)現(xiàn)6-BA 0.6mg/L+IAA 0.8mg/L和6-BA 2mg/L+NAA 1.4mg/L，各誘導(dǎo)出了4個(gè)不定芽，即榛子可以通過(guò)再生途徑長(zhǎng)出新植株。

附圖說(shuō)明

圖1不同來(lái)源葉片的成活情況。