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[發(fā)明專利]一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴(kuò)繁方法在審

專利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 201710383112.3 申請(qǐng)日: 2017-05-26
公開(kāi)(公告)號(hào): CN107047313A 公開(kāi)(公告)日: 2017-08-18
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 董文軒;趙萬(wàn)林;胡愛(ài)雙;劉鎮(zhèn)東 申請(qǐng)(專利權(quán))人: 沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
主分類號(hào): A01H4/00 分類號(hào): A01H4/00
代理公司: 暫無(wú)信息 代理人: 暫無(wú)信息
地址: 110000 遼寧省沈*** 國(guó)省代碼: 遼寧;21
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 雜種 葉片 再生 不定 方法
【說(shuō)明書(shū)】:

技術(shù)領(lǐng)域

發(fā)明涉及組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域,特別涉及一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴(kuò)繁方法。

背景技術(shù)

在生產(chǎn)中,榛子苗木主要以壓條法繁殖,壓條技術(shù)現(xiàn)已基本成熟。但是榛樹(shù)每年根部新萌出的枝條有限,使得壓條繁殖的系數(shù)比較低,育苗速度較慢,遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)中對(duì)榛苗的大量需求。嫁接繁育時(shí),苗木產(chǎn)生大量的根蘗,從而給生產(chǎn)和管理帶來(lái)許多不便,所以很少采用。近些年,我國(guó)科研工作者雖然在棒子的扦插和組織培養(yǎng)方而取得了一定進(jìn)展,但在生產(chǎn)上應(yīng)用的效果并不穩(wěn)定,故而也較少采用。截止目前,還沒(méi)有找到一種比壓條更為簡(jiǎn)單而高效的快速繁殖榛苗的方法。

目前,國(guó)內(nèi)的榛子組培雖然取得了一些進(jìn)展,但離生產(chǎn)還有一定距離,目前我國(guó)還未建立起適用范圍廣的榛子組培基本培養(yǎng)基,選用的外植體仍局限于芽、嫩梢、莖段等幼嫩組織,用成苗的器官、組織誘導(dǎo)脫分化的報(bào)道極少。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此,本發(fā)明提供了一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴(kuò)繁方法,解決了用于平歐雜種榛組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基、激素配比,及用于組織培養(yǎng)的消毒不合理,進(jìn)而導(dǎo)致平歐雜種榛組織成活率低,培養(yǎng)不易成功的問(wèn)題。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明的技術(shù)方案如下:

本發(fā)明提供了一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴(kuò)繁方法,包括以下步驟:

(1)取大田栽培的平歐雜種榛嫩葉作為組織培養(yǎng)的外植體;

(2)將上述外植體用濃度為70~75體積%的酒精消毒10~30s,再用濃度為0.08~0.12體積%的HgCl2消毒5min,沖洗后備用;

(3)將消毒后的外植體剪成長(zhǎng)條狀,接種到含有于含有細(xì)胞生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中,葉片正面朝下放置,黑暗處理14d,得到愈傷組織;

(4)將愈傷組織培養(yǎng)至1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng),所述1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中含有0.6mg/L6-BA+0.8mg/L IAA或2mg/L 6-BA+1.4mg/L NAA,誘導(dǎo)時(shí)間為30天,得到平歐雜種榛再生不定芽。

優(yōu)選的,所述細(xì)胞生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的組合為:TDZ 3mg/L+IBA 0.5mg/L,或

TDZ 3mg/L+IBA 0.3mg/L,或

TDZ 2mg/L+IBA 0.5mg/L,或

TDZ 2mg/L+IBA 0.3mg/L,或

TDZ 2mg/L+NAA 0.03mg/L,或

6-BA 2mg/L+NAA 3mg/L,或

2-4,D 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L。

優(yōu)選的,所述1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中還含有30g/L葡萄糖。

優(yōu)選的,所述1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基pH值為5.8。

優(yōu)選的,所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件為:溫度控制為23℃~25℃,光照時(shí)間12~16h,光照強(qiáng)度2000~3000lx。

現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):

1)葉片愈傷組織,在以光照培養(yǎng)箱內(nèi)水培枝條長(zhǎng)出的葉片,春天大田里剛萌發(fā)的葉片和組培葉片為試材進(jìn)行的試驗(yàn)表明,大田剛萌發(fā)的葉片帶菌少,生命力強(qiáng),消毒較容易且后期長(zhǎng)勢(shì)較好,最佳的消毒方法是用HgCL2消毒5min,成活率能達(dá)到52.0%。

2)在以1/2DKW、DKW、改良MS和NRM為基本培養(yǎng)基誘導(dǎo)葉片愈傷時(shí),1/2DKW和改良MS效果較好,誘導(dǎo)率能達(dá)到100%。葉片反面朝上放置要比正面朝上放置效果佳,黑暗處理有利于愈傷組織的形成,其中以黑暗處理14天,誘導(dǎo)的愈傷形態(tài)最佳。

3)本發(fā)明試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)愈傷組織較適宜的激素組合有TDZ 3mg/L+IBA 0.5mg/L,TDZ 3mg/L+IBA 0.3mg/L,TDZ 2mg/L+IBA 0.5mg/L,TDZ 2mg/L+IBA 0.3mg/L,TDZ 2mg/L+NAA 0.03mg/L,6-BA 2mg/L+NAA 3mg/L,2-4,D 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L,誘導(dǎo)率都能達(dá)到100%,榛子誘導(dǎo)出愈傷組織比較容易。

4)從愈傷組織中誘導(dǎo)不定芽比較困難,目前發(fā)現(xiàn)6-BA 0.6mg/L+IAA 0.8mg/L和6-BA 2mg/L+NAA 1.4mg/L,各誘導(dǎo)出了4個(gè)不定芽,即榛子可以通過(guò)再生途徑長(zhǎng)出新植株。

附圖說(shuō)明

圖1不同來(lái)源葉片的成活情況。

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