[發明專利]一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴繁方法

在審

• 申請號: 201710383112.3
• 申請日: 2017-05-26
• 公開（公告）號: CN107047313A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 董文軒;趙萬林;胡愛雙;劉鎮東
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及組織培養技術領域，特別涉及一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴繁方法。

背景技術

在生產中，榛子苗木主要以壓條法繁殖，壓條技術現已基本成熟。但是榛樹每年根部新萌出的枝條有限，使得壓條繁殖的系數比較低，育苗速度較慢，遠不能滿足生產中對榛苗的大量需求。嫁接繁育時，苗木產生大量的根蘗，從而給生產和管理帶來許多不便，所以很少采用。近些年，我國科研工作者雖然在棒子的扦插和組織培養方而取得了一定進展，但在生產上應用的效果并不穩定，故而也較少采用。截止目前，還沒有找到一種比壓條更為簡單而高效的快速繁殖榛苗的方法。

目前，國內的榛子組培雖然取得了一些進展，但離生產還有一定距離，目前我國還未建立起適用范圍廣的榛子組培基本培養基，選用的外植體仍局限于芽、嫩梢、莖段等幼嫩組織，用成苗的器官、組織誘導脫分化的報道極少。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴繁方法，解決了用于平歐雜種榛組織培養的培養基、激素配比，及用于組織培養的消毒不合理，進而導致平歐雜種榛組織成活率低，培養不易成功的問題。

為了解決上述技術問題，本發明的技術方案如下：

本發明提供了一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴繁方法，包括以下步驟：

(1)取大田栽培的平歐雜種榛嫩葉作為組織培養的外植體；

(2)將上述外植體用濃度為70～75體積％的酒精消毒10～30s，再用濃度為0.08～0.12體積％的HgCl₂消毒5min，沖洗后備用；

(3)將消毒后的外植體剪成長條狀，接種到含有于含有細胞生長素和細胞分裂素的1/2 DKW培養基或改良MS培養基中，葉片正面朝下放置，黑暗處理14d，得到愈傷組織；

(4)將愈傷組織培養至1/2 DKW培養基或改良MS培養基中進行不定芽誘導培養，所述1/2 DKW培養基或改良MS培養基中含有0.6mg/L6-BA+0.8mg/L IAA或2mg/L 6-BA+1.4mg/L NAA，誘導時間為30天，得到平歐雜種榛再生不定芽。

優選的，所述細胞生長素和細胞分裂素的組合為：TDZ 3mg/L+IBA 0.5mg/L，或

TDZ 3mg/L+IBA 0.3mg/L，或

TDZ 2mg/L+IBA 0.5mg/L，或

TDZ 2mg/L+IBA 0.3mg/L，或

TDZ 2mg/L+NAA 0.03mg/L，或

6-BA 2mg/L+NAA 3mg/L，或

2-4，D 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L。

優選的，所述1/2 DKW培養基或改良MS培養基中還含有30g/L葡萄糖。

優選的，所述1/2 DKW培養基或改良MS培養基pH值為5.8。

優選的，所述不定芽誘導培養的條件為：溫度控制為23℃～25℃，光照時間12～16h，光照強度2000～3000lx。

現有技術相比，本發明具有以下優點：

1)葉片愈傷組織，在以光照培養箱內水培枝條長出的葉片，春天大田里剛萌發的葉片和組培葉片為試材進行的試驗表明，大田剛萌發的葉片帶菌少，生命力強，消毒較容易且后期長勢較好，最佳的消毒方法是用HgCL₂消毒5min，成活率能達到52.0％。

2)在以1/2DKW、DKW、改良MS和NRM為基本培養基誘導葉片愈傷時，1/2DKW和改良MS效果較好，誘導率能達到100％。葉片反面朝上放置要比正面朝上放置效果佳，黑暗處理有利于愈傷組織的形成，其中以黑暗處理14天，誘導的愈傷形態最佳。

3)本發明試驗中發現誘導愈傷組織較適宜的激素組合有TDZ 3mg/L+IBA 0.5mg/L，TDZ 3mg/L+IBA 0.3mg/L，TDZ 2mg/L+IBA 0.5mg/L，TDZ 2mg/L+IBA 0.3mg/L，TDZ 2mg/L+NAA 0.03mg/L，6-BA 2mg/L+NAA 3mg/L，2-4，D 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L，誘導率都能達到100％，榛子誘導出愈傷組織比較容易。

4)從愈傷組織中誘導不定芽比較困難，目前發現6-BA 0.6mg/L+IAA 0.8mg/L和6-BA 2mg/L+NAA 1.4mg/L，各誘導出了4個不定芽，即榛子可以通過再生途徑長出新植株。

附圖說明

圖1不同來源葉片的成活情況。