[發(fā)明專利]一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴繁方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710383112.3 | 申請日: | 2017-05-26 |
| 公開(公告)號: | CN107047313A | 公開(公告)日: | 2017-08-18 |
| 發(fā)明(設計)人: | 董文軒;趙萬林;胡愛雙;劉鎮(zhèn)東 | 申請(專利權(quán))人: | 沈陽農(nóng)業(yè)大學 |
| 主分類號: | A01H4/00 | 分類號: | A01H4/00 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 110000 遼寧省沈*** | 國省代碼: | 遼寧;21 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 雜種 葉片 再生 不定 方法 | ||
技術領域
本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)技術領域,特別涉及一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴繁方法。
背景技術
在生產(chǎn)中,榛子苗木主要以壓條法繁殖,壓條技術現(xiàn)已基本成熟。但是榛樹每年根部新萌出的枝條有限,使得壓條繁殖的系數(shù)比較低,育苗速度較慢,遠不能滿足生產(chǎn)中對榛苗的大量需求。嫁接繁育時,苗木產(chǎn)生大量的根蘗,從而給生產(chǎn)和管理帶來許多不便,所以很少采用。近些年,我國科研工作者雖然在棒子的扦插和組織培養(yǎng)方而取得了一定進展,但在生產(chǎn)上應用的效果并不穩(wěn)定,故而也較少采用。截止目前,還沒有找到一種比壓條更為簡單而高效的快速繁殖榛苗的方法。
目前,國內(nèi)的榛子組培雖然取得了一些進展,但離生產(chǎn)還有一定距離,目前我國還未建立起適用范圍廣的榛子組培基本培養(yǎng)基,選用的外植體仍局限于芽、嫩梢、莖段等幼嫩組織,用成苗的器官、組織誘導脫分化的報道極少。
發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此,本發(fā)明提供了一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴繁方法,解決了用于平歐雜種榛組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基、激素配比,及用于組織培養(yǎng)的消毒不合理,進而導致平歐雜種榛組織成活率低,培養(yǎng)不易成功的問題。
為了解決上述技術問題,本發(fā)明的技術方案如下:
本發(fā)明提供了一種平歐雜種榛葉片再生不定芽的擴繁方法,包括以下步驟:
(1)取大田栽培的平歐雜種榛嫩葉作為組織培養(yǎng)的外植體;
(2)將上述外植體用濃度為70~75體積%的酒精消毒10~30s,再用濃度為0.08~0.12體積%的HgCl2消毒5min,沖洗后備用;
(3)將消毒后的外植體剪成長條狀,接種到含有于含有細胞生長素和細胞分裂素的1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中,葉片正面朝下放置,黑暗處理14d,得到愈傷組織;
(4)將愈傷組織培養(yǎng)至1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中進行不定芽誘導培養(yǎng),所述1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中含有0.6mg/L6-BA+0.8mg/L IAA或2mg/L 6-BA+1.4mg/L NAA,誘導時間為30天,得到平歐雜種榛再生不定芽。
優(yōu)選的,所述細胞生長素和細胞分裂素的組合為:TDZ 3mg/L+IBA 0.5mg/L,或
TDZ 3mg/L+IBA 0.3mg/L,或
TDZ 2mg/L+IBA 0.5mg/L,或
TDZ 2mg/L+IBA 0.3mg/L,或
TDZ 2mg/L+NAA 0.03mg/L,或
6-BA 2mg/L+NAA 3mg/L,或
2-4,D 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L。
優(yōu)選的,所述1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基中還含有30g/L葡萄糖。
優(yōu)選的,所述1/2 DKW培養(yǎng)基或改良MS培養(yǎng)基pH值為5.8。
優(yōu)選的,所述不定芽誘導培養(yǎng)的條件為:溫度控制為23℃~25℃,光照時間12~16h,光照強度2000~3000lx。
現(xiàn)有技術相比,本發(fā)明具有以下優(yōu)點:
1)葉片愈傷組織,在以光照培養(yǎng)箱內(nèi)水培枝條長出的葉片,春天大田里剛萌發(fā)的葉片和組培葉片為試材進行的試驗表明,大田剛萌發(fā)的葉片帶菌少,生命力強,消毒較容易且后期長勢較好,最佳的消毒方法是用HgCL2消毒5min,成活率能達到52.0%。
2)在以1/2DKW、DKW、改良MS和NRM為基本培養(yǎng)基誘導葉片愈傷時,1/2DKW和改良MS效果較好,誘導率能達到100%。葉片反面朝上放置要比正面朝上放置效果佳,黑暗處理有利于愈傷組織的形成,其中以黑暗處理14天,誘導的愈傷形態(tài)最佳。
3)本發(fā)明試驗中發(fā)現(xiàn)誘導愈傷組織較適宜的激素組合有TDZ 3mg/L+IBA 0.5mg/L,TDZ 3mg/L+IBA 0.3mg/L,TDZ 2mg/L+IBA 0.5mg/L,TDZ 2mg/L+IBA 0.3mg/L,TDZ 2mg/L+NAA 0.03mg/L,6-BA 2mg/L+NAA 3mg/L,2-4,D 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L,誘導率都能達到100%,榛子誘導出愈傷組織比較容易。
4)從愈傷組織中誘導不定芽比較困難,目前發(fā)現(xiàn)6-BA 0.6mg/L+IAA 0.8mg/L和6-BA 2mg/L+NAA 1.4mg/L,各誘導出了4個不定芽,即榛子可以通過再生途徑長出新植株。
附圖說明
圖1不同來源葉片的成活情況。
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