[發明專利]一種狂犬病免疫原性結合物和疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201710381237.2
• 申請日: 2017-05-25
• 公開（公告）號: CN107137703B
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 薛平;李銀波;王超;趙光偉;王巖;楊冬妮
• 申請（專利權）人: 成都安特金生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/205
• 分類號: A61K39/205;A61P31/14
• 代理公司: 北京馳納智財知識產權代理事務所(普通合伙) 11367
• 代理人: 孫海波

1.一種制備狂犬病免疫原性結合物的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)經純化制成狂犬病病毒抗原原液；

(b)將步驟(a)制備的狂犬病病毒抗原原液與載體蛋白進行化學鍵連接，然后經純化制成狂犬病病毒抗原‐載體蛋白免疫原性結合物,載體蛋白為破傷風類毒素(TT)，化學鍵連接是除肽連接以外的化學連接，狂犬病病毒抗原和所述載體蛋白的化學鍵連接方法包括碳二亞胺法、混合酸酐法、N‐羥琥珀酰亞胺酯法、戊二醛法、重氮化法、琥珀酸酐法、羰基二咪唑法、馬來酰亞胺法、二硫鍵法、過碘酸氧化法、羧甲基羥胺法中的至少一種。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述狂犬病病毒抗原包括狂犬病全病毒顆粒、經重組表達的狂犬病病毒樣顆粒、狂犬病全病毒顆粒經裂解后制備的狂犬病病毒外膜片段、從狂犬病病毒分離純化的犬病病毒糖蛋白、從狂犬病病毒分離純化的核蛋白、從狂犬病病毒分離純化的磷蛋白、從狂犬病病毒分離純化的基質蛋白、從狂犬病病毒分離純化的多聚酶、經重組表達的狂犬病病毒糖蛋白、經重組表達的狂犬病病毒核蛋白、經重組表達的狂犬病病毒磷蛋白、經重組表達的狂犬病病毒基質蛋白、經重組表達的狂犬病病毒多聚酶中的至少一種。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(a)中，所述狂犬病病毒抗原原液為將狂犬病病毒固定毒種接種細胞、培養、收獲病毒液、滅活、純化制成的狂犬病全病毒顆粒原液。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(a)中，所述狂犬病病毒抗原原液為經重組表達、純化制成的狂犬病病毒樣顆粒原液。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(a)中，所述狂犬病病毒抗原原液為按照如下步驟獲得的狂犬病病毒外膜片段原液，狂犬病病毒固定毒種接種細胞、培養、收獲病毒液、滅活、純化而制成的狂犬病全病毒顆粒原液；上述步驟中制備的狂犬病全病毒顆粒原液經裂解、純化制成狂犬病病毒外膜片段原液。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(a)中，所述狂犬病病毒抗原原液為經純化制成的狂犬病病毒糖蛋白原液。

7.根據權利要求1至6任一項所述的方法，其特征在于，所述狂犬病病毒抗原是根據選自PAS株、PV株、PM株、CVS株、Nishigara株、Flury株、Vnukovo‐32株、CTN‐1V株、aGV株中的至少一種狂犬病病毒固定毒株制備的狂犬病病毒抗原。

8.根據權利要求1至6任一項所述的方法，其特征在于，所述狂犬病病毒抗原是根據選自PAS株、PV株、PM株、CVS株、Nishigara株、Flury株、Vnukovo‐32株、CTN‐1V株、aGV株中至少一種狂犬病病毒固定毒株基因重組表達制備的狂犬病病毒抗原。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述狂犬病病毒抗原含有一個或兩個以上與載體蛋白進行化學鍵連接的功能性基團。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述狂犬病病毒抗原含有一個或兩個以上與載體蛋白進行化學鍵連接的功能性基團包括羥基(‐OH)、羧基(‐COOH)、醛基(‐CHO)和氨基(‐NH₂)的至少一種。

11.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述載體蛋白含有一個或兩個以上與狂犬病病毒抗原進行化學鍵連接的功能性基團。

12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，所述載體蛋白含有一個或兩個以上與狂犬病病毒抗原進行化學鍵連接的功能性基團包括羥基(‐OH)、羧基(‐COOH)、醛基(‐CHO)、氨基(‐NH₂)的至少一種。