[發明專利]一種用于保護游離DNA的血液保存劑及其應用

有效

• 申請號: 201710380209.9
• 申請日: 2017-05-25
• 公開（公告）號: CN107083382B
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 朱奇;劉偉華;胡文暉;王靈敏;李巖松
• 申請（專利權）人: 廣州奇輝生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州容大專利代理事務所(普通合伙) 44326
• 代理人: 劉新年

本發明屬于血液樣品的保存試劑，具體涉及一種用于保護游離DNA的血液保存劑。所述保存劑，每100毫升體積包括以下組分：抗凝劑：6.0～8.8g、天然防腐劑：0.1～2.0g、DNA酶抑制劑：4.8～11.7g、葡萄糖：5.0～10.0g、抗溶血劑：5.0～8.0g、嘌呤：0.1～0.5g、緩沖液補至100ml。本發明保存劑可有效防止血細胞破裂釋放基因組DNA造成污染、防止血漿游離DNA降解，為血漿游離DNA提供穩定環境，更重要的是安全，對人體和環境無毒害，有利于對游離DNA更精準的檢測分析。

技術領域

本發明屬于血液樣品的保存試劑，具體涉及一種用于保護游離DNA的血液保存劑及其應用。

背景技術

目前，血漿游離DNA在臨床上應用越來越多，例如無創產前基因檢測和腫瘤診斷都是以血漿游離DNA為檢測目標。在檢測過程中，血漿游離DNA的量的多少是一個重要的檢測指標。人血漿游離DNA含量極少，極易被血液中的DNA酶降解，并且容易受到白細胞裂解釋放的基因組DNA污染，嚴重影響檢測結果。

為了解決這些問題，現階段主要采取的措施有：(1)選用帶抗凝劑(EDTA、肝素、檸檬酸鹽)的采血管采集血液樣本，以防止全血細胞凝血，減少白細胞釋放基因組DNA；(2)在6小時內分離出血漿，4℃低溫保存運輸，并且保存時間不能過長，防止DNA酶降解血漿游離DNA。

通過以上技術處理，對血漿游離DNA的精確檢測可得到一定的改善。但是4℃低溫保存運輸情況下，DNA酶仍具有一定活性，長期保存會使血漿游離DNA大量損失，不利于血漿游離DNA的精確檢測。同時現有條件下，血液的保存和運輸都在低溫下進行，帶來了許多不便，使血漿游離DNA檢測經濟成本較高。

因此，很有必要提供一種用于保護游離DNA的血液保存劑，旨在解決采用現有的血漿游離DNA保存方法，血漿游離DNA易受到基因組DNA污染，易被DNA酶降解，保存時間短、保存溫度低等問題。

WS-10001-(HD-0230)-2002公開了一種紅細胞保存液，其中的葡萄糖、腺嘌呤、甘露醇、磷酸鹽有利于紅細胞的保存，但使具有有核細胞的全血樣品在室溫穩定7至14天時段的效果仍然不理想。

申請號201510226039.X的專利公開了一種保存外周血中游離DNA的保存劑，其保存劑組分中含化學防腐劑，包括二唑烷基脲、咪唑烷基脲、1,3-二氯-5,5-二甲基乙內酰脲、鈉羥甲基甘氨酸、二羥甲基脲、2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇、惡唑烷、鈉羥甲基甘氨酸及金剛烷季銨的一種或多種組合。

申請號201510132774.4的專利公開了一種用于保護游離DNA的血液抗凝劑及其應用，其血液抗凝劑組分含甲醛釋放劑，包括1,3-二羥甲基-5,5-二甲基海因、羥甲基甘氨酸鈉、尼泊金甲酯鈉、尼泊金乙酯鈉、尼泊金丙酯鈉的一種或幾種。

眾所周知，許多化學防腐劑是有毒的，對人體有害，且易對環境造成污染；甲醛是一種致癌的毒性物質，對人體亦有害。

ε-聚賴氨酸是一種具有抑菌功效的多肽，安全、無毒。

表1列舉幾種化學物質的毒性比較，其中ε-聚賴氨酸數據來源于NeDaK等人的《NedaK,SakuraiT,etal.Two-generation reproductionstudywithteratologytestofε-poly-L-lysineby dietaryadministrationinrats[J]》.JppharmcolTher,1999,27:1139-1159.),其他化學物質的數據來源于物競化學品數據庫(http://www.basechem.org/)。

表1幾種化學物質的毒理學數據