[發明專利]全血88-microRNA標記物作為肝臟慢性疾病診斷靶標的應用

有效

• 申請號: 201710378359.6
• 申請日: 2017-05-25
• 公開（公告）號: CN107299132B
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 王輝云;龍瀟冉;張美殷;鄭曉峰
• 申請（專利權）人: 王輝云
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6886
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 舒勝英;胡輝

本發明公開了全血88?microRNA標記物作為肝臟慢性疾病診斷靶標的應用。發明人通過大量研究，鑒定出一組88個microRNA組成的分子標簽，結果顯示這個標簽可以100％的判別正常、慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌。為了驗證此88?microRNA標簽的診斷作用，發明人同時收集另外63例全血樣本組成驗證組進行了驗證，結果表明，88?microRNA分子標簽的診斷的準確率與訓練組原始診斷正常率類似。進一步證明本發明88?microRNA分子標簽可以很好的區分正常、慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌四種人群。

技術領域

本發明涉及一種肝臟慢性疾病的診斷靶標，特別是涉及全血microRNA標志物作為原發性肝細胞癌、肝硬化、慢性乙型肝炎診斷靶標的應用。

背景技術

原發性肝癌主要包括肝細胞癌(HCC)、膽管癌和肝血管瘤。作為癌癥死亡率第三的惡性腫瘤，肝細胞癌占原發性肝癌的83％。世界范圍內，肝細胞癌發病率為惡性腫瘤中的第五位，而在中國為第一位。在臨床實踐中，肝細胞癌總生存率較低的主要原因是診斷滯后和誤診、鑒別診斷尤其是直徑小于3cm的小肝癌的鑒別診斷標志物的缺乏以及準確性較高的非侵入性診斷標志物的缺乏，由此常導致最佳治療窗的錯失和不良預后。肝硬化是肝細胞癌的重要風險因子，而慢性乙型肝炎是肝硬化發生的重要誘因。目前臨床上肝癌主要的非侵入性診斷指標即為血清AFP水平及超聲檢查。然而越來越多的研究表明AFP診斷的準確性和敏感性不盡人意且不能作為獨立的診斷標志物，而超聲檢查難以鑒別診斷肝硬化的良性結節與肝細胞癌的惡性病灶。因此，在肝癌高危人群(肝硬化及慢性乙型肝炎病例)和肝癌病例中鑒別出新的有效敏感的非侵入性診斷指標對肝癌的防治具有重要的意義。

肝細胞癌的致癌過程伴隨著多種癌癥相關基因的表達失常，這些基因往往影響著諸如細胞周期調控、細胞增殖、凋亡、移行與擴散等多種細胞生物學過程。在過去的幾十年中，眾多研究集中在對這些肝細胞癌相關異常表達關鍵基因及其靶蛋白的研究上。近來，越來越多的學者開始關注小干擾RNA：microRNA對肝細胞癌進程的影響。自1993年被發現以來，microRNA對多種多細胞生物的各種生理及病理過程的廣泛影響被不斷報道，包括細胞增殖、分化、免疫反應、組織重塑和包括腫瘤在內的多種人類疾病。一項最近的研究探討了腫瘤中各種microRNA的表達情況及其靶mRNA，發現了各種microRNA的癌基因或抑癌基因樣作用。至此，microRNA在腫瘤發生中的功能與作用研究引起了廣泛的關注。一些特殊microRNA的表達異常被發現與轉移、復發與預后等肝癌臨床病理學特征有關。microRNA是一類高度保守的非編碼小RNA，在脊椎動物中多通過與其靶mRNA3’-UTR的特異性結合并引起miRNA介導的快速脫腺苷化反應導致翻譯抑制、mRNA斷裂或mRNA降解而負性調節基因表達。

microRNA的異常表達廣泛出現在包括肝癌在內的多種腫瘤中。而循環系統中的microRNA，包括血清、血漿、全血中的microRNA被認為在多種腫瘤的非侵入性診斷中發揮重要的作用。其中研究最多的是血清microRNA。據報道，很多腫瘤相關的microRNA在血清樣本中被發現且作為這些腫瘤的診斷指標物具有較高的敏感性。在肝癌中，自Li L等提出一組microRNA標志物在HBV陽性的肝癌血清樣本中表達升高之后，許多研究都試圖通過表達譜分析找出具有診斷價值的血清microRNA標志物。而血漿microRNA在肝癌中已發表的研究目前只有三篇：Jia Fan等通過137例血漿樣本的芯片實驗篩選出對肝癌有診斷價值的一組由7個microRNA組成的分子標簽。Li Jiang等評估了肝癌中一個單一microRNA：miR-106b作為診斷標志物的臨床應用價值。Yang Wen等在9例血漿樣本中應用TLDA芯片篩選出一組由8個microRNA組成的診斷標簽。然而，由于病例樣本以及芯片檢測microRNA探針較少等局限性，上述microRNA分子標簽的可靠性和準確性需要進一步的驗證。