[發明專利]雙膜法離體培養楊樹和雙色蠟蘑外生菌根真菌共生體系的方法

在審

• 申請號: 201710378012.1
• 申請日: 2017-05-25
• 公開（公告）號: CN107125087A
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發明（設計）人: 金海如;蔣湘艷;汪翠翠
• 申請（專利權）人: 浙江師范大學
• 主分類號: A01G17/00
• 分類號: A01G17/00;A01G1/04;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙)33213
• 代理人: 沈淵琪

1.雙膜法離體培養楊樹和雙色蠟蘑外生菌根真菌共生體系的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）楊樹插枝培養：楊樹插枝在含有吲哚丁酸的MS培養基中培養5-7天，再轉移到不含任何激素的MS培養基中培養直至楊樹插枝底部形成2-3cm的根；

2）雙色蠟蘑培養：將外生菌根真菌雙色蠟蘑接種至覆蓋在P5培養基上的賽璐玢薄膜上培養直至長出菌絲；

3）共生培養：將步驟1）得到的楊樹插枝轉移至覆蓋在P20培養基上的賽璐玢薄膜上，再取步驟2）得到的帶有雙色蠟蘑的賽璐玢薄膜面朝下或朝上放在根上，用透氣的膠帶密封培養皿，用不透光材料遮蓋根系部分，然后在24℃,16h光照，8h無光照的條件下培養1-3星期，即可得到共生體系。

2.如權利要求1所述的雙膜法離體培養楊樹和雙色蠟蘑外生菌根真菌共生體系的方法，其特征在于所述的步驟1）中含有吲哚丁酸的MS培養基中含有：宏量元素50ml/l，微量元素100 ml/l，葡萄糖1.0g/l，維生素10 ml/l，IBA溶液2ml/l，瓊脂粉10g/l，所述的IBA溶液濃度為1mg/ml，所述的宏量元素含有硫酸鎂3.6mg/mL，硝酸鉀38mg/mL，磷酸二氫鉀3.4mg/mL，所述的微量元素含有硼酸62ug/ml，氯化鈷0.25ug/ml，硫酸銅0.25ug/ml，EDTA鈉鹽373ug/ml，硫酸亞鐵278ug/ml，硫酸錳169ug/ml，硫酸鋅86ug/ml，所述的維生素含有肌醇10.0mg/mL，煙酸0.1mg/mL，吡哆醇0.1mg/mL，硫胺素1.0mg/mL。

3.如權利要求1所述的雙膜法離體培養楊樹和雙色蠟蘑外生菌根真菌共生體系的方法，其特征在于所述的步驟2）中P5培養基含有：麥芽糖5g/l，酒石酸銨0.5g/l，KH₂PO₄ 1.0 g/l，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/l，葡萄糖1.0 g/l，營養液1.0ml/l，維生素B1 1.0 ml/l。

4.如權利要求1所述的雙膜法離體培養楊樹和雙色蠟蘑外生菌根真菌共生體系的方法，其特征在于所述的步驟1）中P20培養基中含有：酒石酸銨0.5 g/l，KH₂PO₄ 1.0 g/l，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/l，葡萄糖1.0 g/l，營養液1.0ml/ml，維生素B1 1.0ml/l，MES鈉鹽1g/L，瓊脂20g/L，用0.25mol/L的KOH溶液調PH至5.8。

5.如權利要求3或4所述的雙膜法離體培養楊樹和雙色蠟蘑外生菌根真菌共生體系的方法，其特征在于所述的營養液含有鐵離子6.0mg/ml，鋅離子2.0mg/ml，銅離子0.6mg/ml，錳離子5.0mg/ml，硼酸8.0mg/ml。