[發(fā)明專利]豬流行性腹瀉病毒特異性SIgA ELISA檢測試劑盒及其應用

有效

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• 申請日: 2017-05-24
• 公開（公告）號: CN107312088B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發(fā)明（設計）人: 馮力;劉建波;時洪艷
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;G01N33/569;G01N33/577;C12N5/20
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.一種豬流行性腹瀉病毒(PEDV)特異性SIgA ELISA檢測試劑盒，其特征在于包括抗SIgA SC片段的單克隆抗體，所述的單克隆抗體由雜交瘤細胞株2F9分泌產生，所述的雜交瘤細胞株2F9保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其微生物保藏號是：CGMCC No.13813。

2.如權利要求1所述的ELISA檢測試劑盒，其特征在于所述的抗SIgA SC片段的單克隆抗體是用辣根過氧化物酶標記的。

3.如權利要求1所述的ELISA檢測試劑盒，其特征在于還包括由純化的PEDV粒子包被的酶標板、稀釋液、洗滌液、陽性對照、陰性對照、ABTS顯色液以及終止液。

4.如權利要求3所述的ELISA檢測試劑盒，其特征在于所述的陽性對照為PEDV SIgA抗體陽性的豬直腸拭子或初乳樣品，所述的陰性對照為PEDV SIgA抗體陰性的豬直腸拭子或初乳樣品。

5.如權利要求3所述的ELISA檢測試劑盒，其特征在于所述的酶標板上，PEDV粒子的包被濃度為5.8ng/孔。

6.如權利要求3所述的ELISA檢測試劑盒，其特征在于，所述的PEDV粒子為PEDV-LNCT2病毒粒子。

7.如權利要求1-6任一項所述的試劑盒，其特征在于用于PEDV特異性SIgA檢測時，按照以下步驟進行：

(1)從冰箱取出試劑盒，室溫放置30分鐘；

(2)取出酶標板，分別設置陽性對照孔、待測樣品孔、陰性對照孔和空白對照孔，記錄各孔位置，待檢樣品及標準陽性對照樣品、標準陰性對照樣品分別用稀釋液做1：100稀釋后，分別加入待測樣品孔、陽性對照孔、陰性對照孔，空白對照孔不加；

(3)置37℃恒溫箱作用1h；

(4)棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加洗滌液，靜置，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板2-3次；

(5)每孔加入按照1：3000倍稀釋的辣根過氧化物酶標記的抗SIgA SC片段的單克隆抗體，空白對照孔不加；

(6)37℃恒溫箱作用1h；

(7)棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加洗滌液，靜置，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板2-3次；

(8)每孔中加入ABTS顯色液，混勻，37℃避光顯色15min；

(9)終止：每孔中加入終止液終止反應。

(10)測定：以空白孔調零，用酶標儀在405nm波長下測定各孔吸光值；

(11)結果判定

直腸拭子：OD₄₀₅值0.261判為陽性，OD₄₀₅值≤0.261判為陰性；

初乳樣品：OD₄₀₅值0.305判為陽性，OD₄₀₅值≤0.305判為陰性。

8.權利要求1-7任一項所述的試劑盒在制備檢測PEDV特異性SIgA試劑中的用途。

9.一株穩(wěn)定分泌抗SIgA SC片段單克隆抗體的雜交瘤細胞株，命名為2F9，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，其微生物保藏號是：CGMCC No.13813，保藏時間是：2017年3月20日。

10.由權利要求9所述的雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體。

11.權利要求10所述的單克隆抗體在制備檢測特異性SIgA試劑中的用途。