[發(fā)明專利]一種EBV檢測(cè)相關(guān)的特異性多肽及其相關(guān)應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710373746.0
• 申請(qǐng)日: 2017-05-24
• 公開（公告）號(hào): CN107056892A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 康向東;洪建;許建;陶青蘭;郝文斌;吳蓉;相芬芬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市普陀區(qū)中心醫(yī)院
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;G01N33/569
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所31272
• 代理人: 竺路玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生命科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種EBV檢測(cè)相關(guān)的特異性多肽及其相關(guān)應(yīng)用。

背景技術(shù)

EB病毒(Epstein-Barrvirus；EBV)屬于皰疹病毒家族，主要侵犯B淋巴細(xì)胞，引起傳染性單核細(xì)胞增多癥，并與多種淋巴瘤的發(fā)生有密切關(guān)系。EBV在人群中廣泛感染，約90％以上的成人血清EBV抗體呈陽性。

生理狀態(tài)下，在機(jī)體免疫系統(tǒng)作用下，EBV再激活和EBV特異CD8+T細(xì)胞的抗病毒免疫控制處于一種平衡狀態(tài)，使EBV處于未活化狀態(tài)而長(zhǎng)期潛伏在人體淋巴組織中，受感染者終生攜帶病毒而不發(fā)病。但當(dāng)機(jī)體免疫功能低下時(shí)，EBV特異CD8+T細(xì)胞數(shù)量減少或功能降低，體內(nèi)原有的平衡被打破，EB病毒就重新再激活，其體內(nèi)潛伏感染細(xì)胞中的EB病毒基因組被激活而表達(dá)，轉(zhuǎn)化為增殖性感染。由此可見，EBV特異性CD8+T細(xì)胞在抑制EBV再激活中的作用至關(guān)重要，機(jī)體抗EBV的特異性CD8+T細(xì)胞數(shù)量的水平狀況是監(jiān)控EBV是否會(huì)再激活的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

因此，檢測(cè)EBV特異性CD8+T細(xì)胞的數(shù)量，明確特異性CD8+T細(xì)胞的數(shù)量與EBV病毒載量的相關(guān)關(guān)系，對(duì)相關(guān)疾病臨床癥狀的病因分析及疾病的診斷有重要意義。

以往EBV檢測(cè)方法主要包括采用免疫酶染色法或免疫熒光技術(shù)檢測(cè)血清中EBV特異性抗體，以及核酸雜交和PCR等方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)EBV基因組及其表達(dá)產(chǎn)物。

然而，這些檢測(cè)方法只能用于判斷機(jī)體是否存在EBV的感染，卻不能用于評(píng)估機(jī)體感染EBV是否有潛在發(fā)病的可能。定量測(cè)定外周血中EBV特異CD8+T細(xì)胞可以評(píng)估針對(duì)EBV的特異免疫應(yīng)答，預(yù)測(cè)哪些是可能發(fā)生EBV感染的高危病人，在臨床上有極其重要的意義，特別是在免疫缺陷病人和移植病人中。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述問題設(shè)計(jì)合成了一種中國(guó)人高頻率的HLA class I基因型所遞呈的EBV病毒抗原表位序列，可用于檢測(cè)EBV特異性CD8+T細(xì)胞的數(shù)量，監(jiān)測(cè)評(píng)估機(jī)體內(nèi)感染的EBV再激活及致病的可能。

具體地，本發(fā)明的第一個(gè)方面提供了一種用于檢測(cè)外周血EBV特異性CD8+T細(xì)胞數(shù)量的特異性多肽，所述特異性多肽為序列如SEQ ID No.1所示；

SEQ ID No.1：Val Thr Phe SerAla Gly Thr Phe Lys。

SEQ ID No.1也可以簡(jiǎn)寫為：VTFSAGTFK。

進(jìn)一步地，所述特異性多肽為序列如SEQ ID No.1所示多肽的多聚體，所述多聚體優(yōu)選地可以是二聚體、三聚體、四聚體或更多聚體。

另一方面，本發(fā)明還提供上述的特異性多肽在制備檢測(cè)EBV感染的試劑盒或藥物中的應(yīng)用；優(yōu)選地，所述檢測(cè)EBV感染為特異性檢測(cè)中國(guó)人EBV感染。

本發(fā)明同時(shí)還提供一種檢測(cè)EBV的試劑盒，所述試劑盒包含上述的特異性多肽。

優(yōu)選地，上述試劑盒還包括熒光標(biāo)記，其中，所述熒光標(biāo)記可以是熒光素、放射性核素、酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)、金屬顆粒中的任意一種或幾種；所述熒光素選自FITC、RB200、TRITC中的任意一種或幾種；所述放射性核素選自3H、14C、32P、125I、131I中的任意一種或幾種；所述酶選自HRP、AP中的任意一種或幾種。

優(yōu)選地，上述試劑盒還包括anti-CD8抗體和/或熒光標(biāo)記的anti-CD8抗體。

優(yōu)選地，上述試劑盒還包括緩沖液，所述緩沖液選自PBS緩沖液、FACS緩沖液中的任意一種或幾種。

本發(fā)明采用上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下技術(shù)效果：

本發(fā)明提供了一種能夠識(shí)別EBV TCR的HLA class I分子/EBV特異多肽的氨基酸及其多聚體，用以檢測(cè)病人外周血中EBV特異CD8+T細(xì)胞的數(shù)量，從而用以測(cè)定病人外周血中具有EBV特異CD8+T細(xì)胞數(shù)量的臨床界限，監(jiān)測(cè)評(píng)估機(jī)體內(nèi)感染的EBV再激活及致病的可能。

附圖說明

圖1為實(shí)施例一中3組多肽序列多聚體與外周血單個(gè)核細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí)后，反應(yīng)陽性的細(xì)胞增殖結(jié)果。

圖2為實(shí)施例二中SEQ ID No.1序列多聚體檢測(cè)外周血中EBV特異CD8+T細(xì)胞的結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)和具體的介紹，以使更好的理解本發(fā)明，但是下述實(shí)施例并不限制本發(fā)明范圍。

實(shí)施例一在細(xì)胞水平上驗(yàn)證T細(xì)胞對(duì)SEQ ID No.1序列的反應(yīng)性