[發明專利]HCV2a亞型NS5B突變檢測的PCR擴增引物、試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201710373709.X
• 申請日: 2017-05-24
• 公開（公告）號: CN106939360B
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 馮宇鵬;郭曉磊;曾征宇;徐艷艷;劉聲碧
• 申請（專利權）人: 貴州金域醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司44224
• 代理人: 林青中

1.一種HCV 2a亞型NS5B突變檢測的PCR擴增引物，其特征在于，包括第一引物對、第二引物對、第三引物對、第四引物對、第五引物對、第六引物對、第七引物對及第八引物對；所述第一引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述第二引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示，所述第三引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5所示，所述第四引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:4所示，所述第五引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:2所示，所述第六引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:8所示，所述第七引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:5所示，所述第八引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8所示。

2.一種HCV 2a亞型NS5B突變檢測的試劑盒，其特征在于，含有引物試劑，所述引物試劑中的引物包括權利要求1所述的PCR擴增引物。

3.如權利要求2所述的HCV 2a亞型NS5B突變檢測的試劑盒，其特征在于，還包括RNA提取試劑、逆轉錄試劑、PCR擴增試劑及電泳鑒定試劑中的至少一種試劑。

4.如權利要求2或3所述的HCV 2a亞型NS5B突變檢測的試劑盒，其特征在于，還包括含有HCV 2a亞型的HCV陽性對照試劑。

5.一種HCV 2a亞型NS5B突變檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

對含有HCV 2a亞型RNA的待測樣本進行逆轉錄處理，合成HCV cDNA；

對合成的HCV cDNA使用第一引物對和第二引物對進行第一輪PCR擴增，其中，所述第一引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述第二引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示；

對所述第一輪PCR擴增的產物進行測序分析；

所述HCV 2a亞型NS5B突變檢測方法還包括對第一輪PCR擴增的產物進行鑒定的步驟，若產物片段的長度滿足預設要求，則進行所述測序分析，否則使用第三引物對和第四引物對對第一輪PCR擴增的產物進行第二輪PCR擴增，再對第二輪PCR擴增的產物進行所述測序分析，其中，所述第三引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5所示，所述第四引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:4所示；

所述HCV 2a亞型NS5B突變檢測方法還包括對第二輪PCR擴增的產物進行鑒定的步驟，若產物片段的長度滿足預設要求，則進行所述測序分析，否則對合成HCV cDNA使用第五引物對和第六引物對重新進行第一輪PCR擴增，其中，所述第五引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:2所示，所述第六引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:8所示，并對使用所述第五引物對和所述第六引物對進行第一輪PCR擴增的產物進行鑒定，若產物片段的長度滿足預設要求，則進行所述測序分析，否則使用第七引物對和第八引物對對該第一輪PCR擴增的產物進行第二輪PCR擴增，再對擴增的產物進行鑒定和分析，其中，所述第七引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:5所示，所述第八引物對的兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8所示。