[發明專利]藥品中耐膽鹽革蘭陰性菌能力驗證樣品及其制備方法

有效

• 申請號: 201710372892.1
• 申請日: 2017-05-24
• 公開（公告）號: CN107142303B
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 盧行安;徐大軍;劉柳;趙紅陽;劉漢霞;王偉;孫英健;陳若晞
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/06;C12R1/19;C12R1/22;C12R1/01;C12R1/37;C12R1/085;C12R1/445
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務所(特殊普通合伙) 21236
• 代理人: 于忠晶

1.藥品中耐膽鹽革蘭陰性菌能力驗證樣品，其特征是：包括目標菌群與背景菌群，所述目標菌群由大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、奇異變形桿菌、產氣腸桿菌和弗氏檸檬酸桿菌組成，所述背景菌群由金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌組成；所述樣品以海藻糖、脫脂奶粉和無菌水為基質，其中海藻糖的體積分數為12％、脫脂奶粉的體積分數為0.5%；所述樣品中目標菌群的目標濃度為10² CFU/mL，背景菌群的目標濃度為10³ CFU/mL。

2.根據權利要求1所述的藥品中耐膽鹽革蘭陰性菌能力驗證樣品的制備方法，其特征是：包括樣品添加菌株的選擇、凍干保護劑的配制、樣品凍干、樣品的均勻性和穩定性試驗四個步驟，其中樣品凍干過程為：菌株復蘇傳代—增菌—菌懸液配制—凍干和包裝—儲存，具體過程為：

（1）菌株復蘇傳代

將標準菌株接種到營養瓊脂斜面培養基中，在36±1℃下使其復蘇和生長，并對復蘇的菌株進行鑒定；

（2）增菌

目標菌群培養至對數生長期末，背景菌群培養至穩定期，從斜面刮取菌落，加到10mL的凍干保護劑中制成相應單一菌種的菌液；

（3）菌懸液配制

將上一過程得到的菌液與凍干保護劑混合，按目標菌群的目標濃度10² CFU/mL和背景菌群的目標濃度10³ CFU/mL配制菌懸液，分別配制6個目標菌的菌懸液和2個背景菌的菌懸液，分別按1:1體積比混合形成目標菌群懸液和背景菌群懸液，再將目標菌群懸液與背景菌群懸液按1:1體積比混合，得到混合菌懸液，置于磁力攪拌器上不斷攪拌下分裝到樣品瓶中，加上瓶塞，但要留有空隙，不要蓋實；

（4）凍干和包裝

將裝有混合菌懸液的樣品瓶開蓋放入凍干機中，冷凍干燥40～50h，當樣品冷凍干燥結束后，直接進行箱內加塞，關閉機器，樣品瓶中樣品為真空狀態；

冷凍干燥機參數按如下設置：

冷凍速度 (Cooling Rate) 0.5℃/min

早期冷凍點 (Incipient Freezing Point) -1℃ 15min

冷凍溫度 (Cooling temperature) -40℃

共 熔 點 (Melting Point Eutectic temperature) -29℃

加熱溫度 (Heating temperature) 20℃ 120min；

（5）儲存

將樣品放置在-18℃條件下避光保存，從全部樣品中隨機挑選樣品進行均勻性和穩定性試驗，滿足要求后發放給參試實驗室進行實驗室間比對。

3.根據權利要求2所述的藥品中耐膽鹽革蘭陰性菌能力驗證樣品的制備方法，其特征是：所述凍干保護劑為含有海藻糖和脫脂奶粉的無菌水，其中體積分數分別為：海藻糖12%、脫脂奶粉0.5%。

4.根據權利要求2所述的藥品中耐膽鹽革蘭陰性菌能力驗證樣品的制備方法，其特征是：所述樣品的均勻性和穩定性試驗按照CNAS—GL03《能力驗證樣品均勻性和穩定性評價指南》進行。