[發明專利]一種年青煤降解液綜合效價檢測方法

有效

• 申請號: 201710372781.0
• 申請日: 2017-05-24
• 公開（公告）號: CN107219334B
• 公開（公告）日: 2019-07-16
• 發明（設計）人: 秦誼;賈慶明;李寶才;張敉;張惠芬;向誠
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種年青煤降解液綜合效價檢測方法，檢測年青煤降解液對作物種子萌發和生長過程中多種代表性優選參數的影響，通過對比研究轉化成一種綜合生物效價來表征降解液對作物生長發育的整體調節作用；相對于化學分析法，該方法更直觀、準確地檢測年青煤降解液對植物生長發育的整體調節作用的大小，該方法穩定性好，適用性強，標準化程度高；同時易操作、時間短、成本低，適于大規模推廣使用，填補了年青煤降解液活性檢測方法的空白，為其產品的推廣應用和產業化開發掃除一大障礙。

技術領域

本發明涉及一種年青煤降解液綜合效價檢測方法，尤其是涉一種評價年青煤降解液調節植物生長活性的綜合效價的檢測方法，屬于生物檢測技術領域。

背景技術

研究人員在用氧化劑對褐煤、泥炭等年青煤進行氧化降解時，發現了一種無色透明的蒸餾液，其pH在2.0到2.6之間，呈弱酸性，將其稱為年青煤降解液。初步研究發現該降解液在調節土壤酸堿度，提高種子發芽率，增強作物抗逆性（抗鹽、抗旱），促進作物生長發育，增加作物產量等方面都具有極好的效果，可作為一種新型的多功能農作物調理劑。其制備方法及作為植物生長調節劑的應用已申請國家發明專利，并獲得授權（申請號：201410006333.5）。目前，年青煤降解液作為一種作用顯著的新型作物生長調節劑已進入商品化階段，但其調節植物生理活性的評價方法一直是其推廣應用和商品化的瓶頸。到現在為止還沒有行之有效的針對該降解液活性的化學或生物的標準化檢測方法出現。一方面，降解液含有大量小分子的酸性物質，極性極強，且性質近，難以使用常見的HPLC、GC等技術手段對其進行分離鑒定及定量分析；另一方面，對于一種新型的天然活性物質，即使實現了部分化學成分的定量分析，因其活性的物質基礎不明，也難以確定哪些是活性物質，是否具有代表性，不同成分之間是否具有協同作用等。再者，以作物生長發育程度或產量作為檢測指標的常規方法，因影響因素多、周期長、成本高，也不適于標準化方法的建立及推廣應用，這些原因使年青煤降解液活性測定標準化方法的建立面臨巨大挑戰。

更進一步的研究發現，年青煤降解液上述諸多活性之間存在很大的關聯性，即通過提高種子發芽率、調節發育過程、增強作物抗逆性（抗鹽、抗旱）等作用從整體上促進作物生長發育，最終增加作物產量。但對于不同來源或不同稀釋濃度的降解液樣品，各種作用之間并不是完全的正相關，例如可能存在某一樣品可以增加作物種子發芽率，卻抑制胚根伸長及降低幼苗重量的情況，或者說整體活性相似的不同樣品對植物不同生長參數的調節強度是不一致的，所以單一的活性指標難以準確地評價降解液的整體活性。

發明內容

針對以上問題，本發明建立了一套綜合效價檢測方法，即檢測鹽脅迫環境下年青煤降解液對作物種子萌發和生長過程中多種代表性優選參數的影響，通過對比研究轉化為生物效價來表征降解液對作物生長發育的整體調節作用；相對于化學分析法，該方法可以更直觀、準確地表征年青煤降解液調節植物生長的活性，在其生物檢測方面取得突破，填補了年青煤降解液這一新型天然產物活性檢測方法的空白。

本發明提供一種年青煤降解液綜合效價檢測方法，特別是一種生物檢測的標準化方法，具體內容如下：

（1）取籽粒飽滿的白菜種子用水漂洗，經10%NaClO消毒8-10min后用無菌蒸餾水沖洗6-8次，用蒸餾水或稀釋一百倍的年青煤降解液將白菜種子浸泡5-6h進行致敏；

（2）取步驟（1）同批用蒸餾水浸泡致敏一致的白菜種子240粒，整齊擺放到3個直徑為15cm的底部鋪有1層濾紙的培養皿中，每皿80粒（即平行試驗三次），各加入15mL含120mmol/L NaCl的Hoagland's培養液，記為蒸餾水組；

（3）另取步驟（1）同批用年青煤降解液浸泡致敏一致的白菜種子240粒，整齊擺放到3個直徑為15cm的底部鋪有1層濾紙的培養皿中，每皿80粒（即平行試驗三次），各加入15mL含120mmol/L NaCl的Hoagland's培養液，記為降解液組；