[發(fā)明專利]一種無病毒栝樓的培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710371956.6
• 申請日: 2017-05-24
• 公開（公告）號: CN107155886A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馮繼廣;程海洋
• 申請（專利權(quán)）人: 四川省苗源生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11371
• 代理人: 錢學(xué)宇

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物培育領(lǐng)域，具體而言，涉及一種無病毒栝樓的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

栝樓，葫蘆科栝樓屬多年生草本植物，別名瓜蔞、吊瓜、野葫蘆等。《中華醫(yī)藥》記載，其果實、根是常用的名貴中藥，栝樓有解熱止渴、利尿、鎮(zhèn)咳祛痰等作用。種子含脂花肪油；果實含三萜皂苷、有機酸、樹脂、糖類、色素；根含蛋白質(zhì)、皂苷、酸類。栝樓是治療肺熱、腫痛的特效藥，近些年發(fā)現(xiàn)其還有調(diào)節(jié)免疫、抗心肌缺血、抗癌抗衰老等醫(yī)療和保健作用。

目前，栝樓的繁殖主要為無性繁殖方式，即采用塊根小段無性繁殖；但栝樓在無性繁殖過程中，容易感染病毒，使優(yōu)良品種退化。因此，為培育無病毒的栝樓優(yōu)良種系，特提出本專利技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種無病毒栝樓的培養(yǎng)方法，該培養(yǎng)方法易于控制實施，可在較短的時間內(nèi)繁殖得到大量的無病毒的優(yōu)良種系，提高栝樓種苗的品質(zhì)。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

一種無病毒栝樓的培養(yǎng)方法，其包括：

取栝樓苗的莖尖分生組織，將帶有1～2個葉原基的莖尖接種到第一培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，直至培養(yǎng)出含20～30個小芽的芽叢；

將芽叢轉(zhuǎn)入第二培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至長出1～2cm的叢生苗后，將叢生苗分成單株并轉(zhuǎn)入第三培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，得到組培苗。

一種栝樓的脫毒培養(yǎng)方法，其包括：

取栝樓苗的莖尖分生組織，將帶有1～2個葉原基的莖尖接種到第一培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，直至培養(yǎng)出含20～30個小芽的芽叢；其中，第一培養(yǎng)基是由MS培養(yǎng)基與0.45～0.55mg/L的6-芐氨基嘌呤、以及0.04～0.06mg/L的萘乙酸混合后形成的。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

本公開內(nèi)容提供的這種無病毒栝樓的培養(yǎng)方法，采用帶有1～2個葉原基的莖尖進行愈傷組織培養(yǎng)，使其生長、分化形成無病毒的栝樓苗。該方法是基于病毒在植物體內(nèi)分布不均勻的理論，即植物的莖尖分生組織一般不帶病毒的，所以通常采用0.1毫米左右的莖尖分生組織，帶1-2個葉原基，進行培養(yǎng)，即可得到無病毒種苗，故而無需進行病毒鑒定工作即可進行擴大繁殖。

該培養(yǎng)方法易于控制實施，操作相對較簡單，成苗時間短，可在較短的時間內(nèi)繁殖得到大量的無病毒的優(yōu)良種系，提高栝樓種苗的品質(zhì)。通過這種培養(yǎng)方法培育的無病毒栝樓，具有生長健壯、不帶病毒、品質(zhì)優(yōu)良的特性，從而大幅提高栝樓藥材的質(zhì)量和藥效。

具體實施方式

下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

本實施方式提供一種無病毒栝樓的培養(yǎng)方法，其包括下述步驟：

步驟S1初代培養(yǎng)：取栝樓苗的莖尖分生組織，將帶有1～2個葉原基的莖尖接種到第一培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，直至培養(yǎng)出含20～30個小芽的芽叢。

在本實施方式中，栝樓苗既可以為無菌苗，也可以為大田兩年生的正常苗，都可以滿足初代培養(yǎng)的植株取材需求。較為具體的，將栝樓苗在無菌條件和解剖顯微鏡下剝?nèi)∏o尖分生組織，以帶有1～2個葉原基的莖尖為度，莖尖分離后，迅速接入第一培養(yǎng)基中。

值得強調(diào)的是，由于本實施方式提供的培養(yǎng)方法，選用的植物組織為莖尖分生組織，該分生組織一般不帶病毒，所以采用0.1毫米左右的帶1～2個葉原基的莖尖分生組織，進行培養(yǎng)，即可得到無病毒苗，故而無需進行病毒鑒定工作即可進行擴大繁殖。

可選擇的，培養(yǎng)莖尖的條件為：環(huán)境溫度23～28℃、日照時間13～14h、光照強度1200～1300LX、相對濕度75～85％。進一步優(yōu)選的，培養(yǎng)莖尖的條件為：環(huán)境溫度24～27℃、日照時間13.4～13.7h、光照強度1230～1280LX、相對濕度78～82％；更為具體的培養(yǎng)條件為：環(huán)境溫度25℃、日照時間13.5h、光照強度1250LX、相對濕度80％。在這些條件下，進行莖尖分生組織的培養(yǎng)，莖尖所處的環(huán)境適宜，生長和分化速度快，能夠在相對較短的時間內(nèi)長出小芽，形成芽叢，發(fā)芽率高、培養(yǎng)周期短。

進一步的，第一培養(yǎng)基是由MS培養(yǎng)基與0.45～0.55mg/L的6-芐氨基嘌呤、以及0.04～0.06mg/L的萘乙酸混合后形成的；或者第一培養(yǎng)基是由MS培養(yǎng)基與0.5mg/L的6-芐氨基嘌呤、以及0.05mg/L的萘乙酸混合后形成的。