[發明專利]一種以脾臟細胞外基質為原料的水凝膠及其制備方法

有效

• 申請號: 201710371237.4
• 申請日: 2017-05-24
• 公開（公告）號: CN107224617B
• 公開（公告）日: 2020-01-03
• 發明（設計）人: 朱楚洪;劉歌
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: A61L27/52
• 分類號: A61L27/52;A61L27/36;A61L27/50;A61L26/00
• 代理公司: 50102 重慶市恒信知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉小紅;李金蓉

1.一種以脾臟細胞外基質為原料的水凝膠，由以下步驟制備得到：

(1)制備生物基質材料：取同種或異種來源的脾臟組織進行處理制備成生物基質材料；處理方法是將取材的脾臟去除脾臟組織中的脂肪組織，剪成1～3mm³的組織小塊浸泡在生理鹽水中漂洗，然后經脫細胞處理，得到脫細胞的脾臟細胞外基質；

(2)消化：用去離子水清洗步驟(1)獲得的脾臟細胞外基質，震蕩漂洗，每隔40～60分鐘換一次水，共15～25次，去除殘留的脫細胞試劑，真空冷凍干燥，稱重，加入0.01～0.2M的鹽酸溶液并研磨成勻漿，加入胃蛋白酶，恒溫攪拌進行消化，得到均勻粘稠的脾臟細胞外基質溶液；

(3)孵育成膠：在冰浴條件下，用1M的氫氧化鈉溶液調節脾臟細胞外基質溶液PH至中性，然后加入PBS溶液，置于37℃孵育成膠，于4℃保存。

2.根據權利要求1所述一種以脾臟細胞外基質為原料的水凝膠，其特征在于：所述脫細胞處理包括：將脾臟組織小塊浸泡在脫細胞液中，置于37℃，80r/min條件下震蕩20～40小時，更換脫細胞液，置于25℃，60r/min條件下震蕩30～50小時。

3.根據權利要求2所述一種以脾臟細胞外基質為原料的水凝膠，其特征在于：所述脫細胞液為0.05％～0.3％SDS+1.5％～4％EGTA，并調節pH至中性。

4.根據權利要求1所述一種以脾臟細胞外基質為原料的水凝膠，其特征在于：所述真空冷凍干燥中凍干溫度為-80～-60℃，真空度為0.1～0.2mbar，時間為24～48h。

5.根據權利要求1所述一種以脾臟細胞外基質為原料的水凝膠，其特征在于：所述胃蛋白酶的濃度為1mg/ml，攪拌溫度為25℃，攪拌頻率為100rmp，攪拌時間為24～48h。

6.一種以脾臟細胞外基質為原料的水凝膠的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備生物基質材料：取同種或異種來源的脾臟組織進行處理制備成生物基質材料；處理方法是將取材的脾臟去除脾臟組織中的脂肪組織，剪成1～3mm³的組織小塊浸泡在生理鹽水中漂洗，然后經脫細胞處理，得到脫細胞的脾臟細胞外基質；

(2)消化：用去離子水清洗步驟(1)獲得的脾臟細胞外基質去除殘留的脫細胞試劑，真空冷凍干燥，稱重，加入0.01～0.2M的鹽酸溶液并研磨成勻漿，加入胃蛋白酶，恒溫攪拌進行消化，得到均勻粘稠的脾臟細胞外基質溶液；

(3)孵育成膠：在冰浴條件下，用1M的氫氧化鈉溶液調節脾臟細胞外基質溶液PH至中性，然后加入PBS溶液，置于37℃孵育成膠，于4℃保存。

7.根據權利要求6所述一種以脾臟細胞外基質為原料的水凝膠的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述脫細胞處理包括：將脾臟組織小塊浸泡在脫細胞液中，置于37℃，80r/min條件下震蕩20～40小時，更換脫細胞液，置于25℃，60r/min條件下震蕩30～50小時。

8.根據權利要求7所述一種以脾臟細胞外基質為原料的水凝膠的制備方法，其特征在于：所述脫細胞液為0.05％～0.3％SDS+1.5％～4％EGTA，并調節pH至中性。

9.根據權利要求6所述一種以脾臟細胞外基質為原料的水凝膠的制備方法，其特征在于：步驟(2)中所述真空冷凍干燥中凍干溫度為-80～-60℃，真空度為0.1～0.2mbar，時間為24～48h。

10.根據權利要求6所述一種以脾臟細胞外基質為原料的水凝膠的制備方法，其特征在于：步驟(2)中所述胃蛋白酶的濃度為1mg/ml，攪拌溫度為25℃，攪拌頻率為100rmp，攪拌時間為24～48h。