[發明專利]一種檢測沙門氏菌的方法

有效

• 申請號: 201710370959.8
• 申請日: 2017-05-24
• 公開（公告）號: CN107084962B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 劉素;冷雪琪;王玉;裴倩倩;崔雪君;韓聰;徐成功;劉學嬌;秦藝菲
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張世靜

本發明提供了一種檢測沙門氏菌的方法，本發明制備方法：合成DNA銀納米簇；Phi 29聚合酶和Nt.AlwI內切酶共同作用的指數放大與鏈置換循環放大的均相反應，后進行熒光檢測。本發明利用了核酸適配體的特異型識別，將aptamer設計到發夾結構中實現了對目標物沙門氏菌的高特異性檢測；利用Phi 29聚合酶和Nt.AlwI內切酶共同作用以及鏈置換反應，實現了Trigger的循環利用，起到了信號放大的作用，有效地提高了檢測的靈敏度。

技術領域

本發明涉及一種檢測沙門氏菌的方法，屬于微生物檢測技術領域。

背景技術

沙門氏菌是一種常見的食源性致病菌，是革蘭氏陰性、細胞內寄生的一種腸道菌。該菌廣泛存在于自然界中，不但能引起家畜家禽及其他動物發生急性、慢性或隱性感染，而且還能通過污染食物導致人的食物中毒，對人類造成很大威脅。據統計在世界各國的種類細菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首。沙門氏菌每年會導致約四萬美國人病倒，約600人死亡。在我國沙門氏菌是食物中毒中最常見的致病菌，占食物中毒的第一位。沙門氏菌病的臨床癥狀主要包括頭痛、腹痛、發熱等，死亡率在1 %，對人危害很大。

目前報道的檢測沙門氏菌的方法包括傳統的培養方法、酶聯免疫法、PCR技術等。傳統的沙門氏菌檢測方法檢測周期長達一周，工序繁瑣，設備昂貴，這遠遠不能滿足要求。因此，食品工業急需一種快速、準確、簡便、微量的分析方法，以對食品中的沙門氏菌進行檢測。

發明內容

為了解決以上現有技術中檢測沙門氏菌的方法特異性和靈敏度都比較低、成本高、檢測周期長的問題，本發明提供了一種特異性和靈敏度高、檢測速度快、成本低的基于血紅素/G-四聯體誘導DNA銀納米簇光致電子轉移檢測沙門氏菌的方法。

本發明中一共用到了4條DNA鏈，其序列分別是：

H1：5’-AGT AAT GCC CGG TAG TTA TTC AAA GAT GAG TAG GAA AAG ATC CCC GCA TTA CT-3’（SEQ ID NO.1）；

Primer：5’-AGTAATGCGG-3’(SEQ ID NO.2)；

H2：5’-GGT AGT TAT TCA AAG ATG AGT AGG TTT TGG TTG AGT ACT TTG AAT AACTAC CTT GGG TAG GGC GGG TTG GG-3’(SEQ ID NO.3)；

H3：5’-CCT CCT TCC TCC CGG TAG TTA TTC AAA GTA CAC AAG CAA AAC CTA CTCATC TTT GAA TAA CTA CCG CC-3’(SEQ ID NO.4)；