[發(fā)明專利]牛冠狀病毒重組多表位抗原及其應用

有效

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• 申請日: 2017-05-23
• 公開（公告）號: CN107033250B
• 公開（公告）日: 2020-01-21
• 發(fā)明（設計）人: 程凱慧;于志君;王洪梅;何洪彬;楊宏軍;張亮;沈付嬈;朱彤
• 申請（專利權）人: 山東省農業(yè)科學院奶牛研究中心;山東省農業(yè)科學院家禽研究所;山東師范大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/215;A61P31/14;G01N33/68;G01N33/569;C07K16/10;C07K16/06
• 代理公司: 37221 濟南圣達知識產權代理有限公司
• 代理人: 薛鵬喜

本發(fā)明公開了牛冠狀病毒重組多表位抗原，還公開了該牛冠狀病毒重組多表位抗原在預防和診斷牛冠狀病毒中的應用，屬于分子免疫學領域。本發(fā)明的牛冠狀病毒重組多表位抗原的氨基酸序列是牛冠狀病毒BCoV S蛋白抗原表位的串聯(lián)體。本發(fā)明將能引起中和抗體的牛冠狀病毒重組多表位抗原作為免疫原或疫苗，免疫動物機體后能夠產生針對牛冠狀病毒BCoV的中和抗體，并能夠在體外中和BCoV，阻止病毒感染動物機體。而且，本發(fā)明的牛冠狀病毒重組多表位抗原還能夠作為檢測牛冠狀病毒BCoV抗體或者多肽抗體的試劑。

技術領域

本發(fā)明涉及分子生物學及免疫學領域技術領域，具體涉及一種牛冠狀病毒重組多表位抗原及其應用。

背景技術

牛冠狀病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是20世紀70年代發(fā)現的牛腹瀉病原，我國于1985 年首次分離到。臨床上主要表現為新生犢牛腹瀉、拉血樣糞便、成年牛冬季嚴重水樣腹瀉(有時伴有血和黏液)等特征。該病主要通過消化道和呼吸道傳播，發(fā)病率高。一旦發(fā)病極易引起群體感染，并且誘發(fā)繼發(fā)感染，給以集約化飼養(yǎng)為特點的養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經濟損失。目前臨床上主要以滅活疫苗和減毒活疫苗的防控為主，但滅活疫苗和減毒活疫苗存在生物危害性和遺傳變異致使原疫苗效力喪失等問題。

表位疫苗是近年發(fā)展起來的一種新型疫苗，它是利用基因工程的手段，體外表達或人工合成病原微生物的抗原表位，將其作為一種疫苗使用。表位又稱抗原決定簇，是抗原分子中決定抗原特異性的化學基團，是能夠與T細胞抗原受體或B細胞抗原受體特異性結合的基本單位，最終激起機體的免疫反應，形成對病原微生物的免疫能力，因此，表位疫苗符合未來疫苗的發(fā)展方向。

牛冠狀病毒(BCoV)是單股正鏈不分段的RNA病毒，基因組大小約為32kb。基因組含有五種結構蛋白，分別為核衣殼蛋白(N,52kDa)，膜蛋白(M,25kDa)，纖突蛋白(S,180kDa)，小衣殼蛋白(E,8kDa)，血凝素酯酶蛋白(HE,65kDa)其中S蛋白主要負責病毒的吸附，介導病毒與宿主膜融合，誘導宿主免疫反應和病毒中和抗體。因此，可以選擇S蛋白的抗原表位作為診斷抗原，用于BCoV抗體水平的檢測和表位疫苗的研制。但目前尚未有關于牛冠狀病毒表位疫苗的報道。

發(fā)明內容

針對上述現有技術，本發(fā)明的目的是提供一種牛冠狀病毒重組多表位抗原及其應用。

為實現上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：

本發(fā)明的第一方面，提供一種牛冠狀病毒重組多表位抗原，是具有如下氨基酸序列之一的多肽：

(a)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

(b)將SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列通過一個或多個氨基酸殘基的替換、缺失或插入而獲得的仍具有抗原表位功能的蛋白衍生物。

所述一個或多個氨基酸殘基的替換、缺失或插入為不超過10個氨基酸殘基的替換、缺失或插入。

本發(fā)明的第二方面，提供編碼上述牛冠狀病毒重組多表位抗原的基因，是具有如下核苷酸序列之一的多核苷酸：

(1)SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

(2)在嚴格條件下與SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列雜交且編碼具有相同功能的多肽的核苷酸序列。

本發(fā)明的第三方面，提供一種重組載體，其含有上述編碼牛冠狀病毒重組多表位抗原的基因。

進一步的，本發(fā)明還提供一種重組菌，其被上述的重組載體轉化。

經重組載體轉化的重組菌選自重組大腸桿菌或重組酵母菌。

本發(fā)明的第四方面，提供上述的牛冠狀病毒重組多表位抗原或編碼所述重組多表位抗原的基因在制備表位疫苗中的應用。