[發明專利]一種四氧化三鐵免疫納米磁珠及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710366724.1
• 申請日: 2017-05-23
• 公開（公告）號: CN107132346A
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發明（設計）人: 張愛琳;鐘凱;樊秀花;張登科
• 申請（專利權）人: 天津農學院
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 北京鼎佳達知識產權代理事務所(普通合伙)11348
• 代理人: 王偉鋒,劉鐵生

1.一種四氧化三鐵免疫納米磁珠的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備納米磁珠：

將Fe²⁺的鐵鹽和Fe³⁺的鐵鹽溶解于水中，得鐵鹽溶液；所述Fe²⁺的鐵鹽中Fe²⁺和Fe³⁺的鐵鹽中Fe³⁺的摩爾比為1:1-2；

在65-75℃的溫度下，先超聲鐵鹽溶液4-6分鐘，再加入過量的氫氧化鈉溶液并攪拌25-35分鐘，再靜置晶化2-3小時，得四氧化三鐵沉淀；

通過磁分離將四氧化三鐵沉淀分離出來，先用蒸餾水洗滌2-3次，再無水乙醇洗滌2-3次，得四氧化三鐵納米磁珠無水乙醇混合液；

(2)納米磁珠的表面修飾：

將四氧化三鐵納米磁珠無水乙醇混合液用無水乙醇稀釋5-7倍，得稀釋后的納米磁珠無水乙醇混合液；

超聲振蕩稀釋后的納米磁珠無水乙醇混合液25-35分鐘后，加入硅烷化試劑，室溫下攪拌6-8小時，磁分離，得硅烷化四氧化三鐵納米磁珠；所述硅烷化試劑為APTES；

用無水乙醇溶液洗滌硅烷化四氧化三鐵納米磁珠2-3次，得到硅烷化四氧化三鐵納米磁珠無水乙醇混合液；

再用PBS緩沖液洗滌硅烷化四氧化三鐵納米磁珠無水乙醇混合液2-3次，得磁珠混合液；

向磁珠混合液中加入戊二醛溶液,室溫下振蕩交聯1.5-2.5小時，再磁分離，棄去上清液，得氨基化四氧化三鐵納米磁珠混合液混合液；

(3)免疫磁珠的制備：

用抗體包被氨基化四氧化三鐵納米磁珠混合液混合液，室溫下振蕩固定1.5-2.5小時，磁分離，得包被后的氨基化四氧化三鐵納米磁珠混合液，用蒸餾水和PBS緩沖液分別洗滌3-4次，得四氧化三鐵免疫納米磁珠；所述抗體為堅果過敏小鼠陽性血清。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中，

所述步驟(1)中，鐵鹽溶液中Fe²⁺的摩爾濃度為0.2-0.35mol/L，Fe³⁺的摩爾濃度為0.2-0.4mol/L；

所述氫氧化鈉溶液的摩爾濃度為0.5-1mol/L。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，其中，

所述Fe²⁺的鐵鹽為FeSO₄·7H₂O，Fe³⁺的鐵鹽為FeCl₃·6H₂O。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中，

所述步驟(2)中，所述APTES與稀釋后的納米磁珠無水乙醇混合液的體積比為1:350-400；

所述戊二醛溶液的用量為硅烷化四氧化三鐵納米磁珠無水乙醇混合液的3-5倍。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，其中，

所述戊二醛溶液的體積分數為3-7％。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中，

所述步驟(3)中，抗體與氨基化四氧化三鐵納米磁珠混合液的體積比0.8-1.2:1。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，其中，

所述步驟(3)中，抗體的稀釋度為1:600-1000。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，其中，

所述抗體的稀釋度為1:800。

9.一種四氧化三鐵免疫納米磁珠的應用，其特征在于，包括：

采用酶聯免疫競爭法檢測抗原；其中，所述抗原為堅果過敏蛋白，所述第一抗體為四氧化三鐵免疫納米磁珠。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，其中，所述第二抗體為羊抗鼠IgE-HRP抗體。