[發明專利]一種利用化學酶法制備苯烯莫德的方法

在審

• 申請號: 201710364630.0
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN107058407A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 楊登峰;潘麗霞
• 申請（專利權）人: 廣西科學院
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22;C07C319/12;C07C323/25
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司11340
• 代理人: 但玉梅

【技術領域】

本發明涉及制藥工程領域，特別涉及一種利用化學酶法制備苯烯莫德的方法。

【背景技術】

苯烯莫德(Benvitimod)是新一代二苯乙烯類抗炎藥物，用于治療多種重大免疫性疾病，如牛皮癬、濕疹、發膿性結腸炎和多種過敏性疾病。它被科技部列為“國家科技重大專項”，2016年12月，已經提交了新藥上市申請(化藥1類)，用于治療皮膚病與牛皮癬。該化合物最初由Welchem Biotech公司研發，申請了專利US2003171429A1和US2005059733A1，后授權給施泰福(葛蘭素史克子公司)和天濟藥業。

苯烯莫德最初是一種來源于細菌(Photohabdus luminescens)的天然產物，但目前，主要是通過有機合成的方法進行制備，其中，主要是四種合成路線，分別是中國發明專利CN10153157B、CN104003848B、CN103265412A和CN103992212A。這些方法一般通過5-7步反應，涉及溴化、甲基化、氧化、還原、脫甲基化和縮合等反應。反應過程中，常常是在高溫高壓、貴重金屬催化劑、有機溶劑條件下進行，不適宜環保綠色的主題。另外，過多的反應步驟、繁瑣的操作、產品收率偏低、產物選擇性差和反應后產物純化操作復雜等問題也影響這些工藝的工業化生產。

【發明內容】

鑒于上述有機合成方法制備苯烯莫德過程中的諸多問題，本發明目的在于提供一種利用化學酶法制備苯烯莫德的方法，該技術創新性的模擬在生物體內合成苯烯莫德的途徑，利用簡單的合成方法合成兩個中間體，然后利用生物酶StlD和StlC為催化劑完成縮合和芳香化反應，在水溶液和溫和的反應條件下可高效催化合成苯烯莫德，具有高效、低成本的特點，適合于大規模工業化生產。

為達到上述目的，本發明所采用的技術方案是：一種利用化學酶法制備苯烯莫德的方法，先以有機合成的方法合成中間體1和中間體2，再利用酮酶StlD和芳香化酶StlC催化中間體1和中間體2，合成苯烯莫德；包括以下步驟：

(1)按照摩爾份數計，先將1份異戊酸與0.5～5份丙二酸亞異丙酯混合后放入反應器中，加入500～1500份二氯乙烷，攪拌均勻，在N，N'-二環己基碳二亞胺與4-二甲氨基吡啶的催化作用下，在20～25℃下反應2～4h，然后減壓蒸餾除去二氯乙烷，并用硅膠柱分離出產物，接著將產物和0.5～5份N-乙酰基半胱胺放入500～1500份甲苯中，在75～85℃下反應3～6h，最后減壓蒸餾除去甲苯，并經過硅膠柱分離后，放在TLC板上，在波長為256nm的紫外線照射下，析出的產物即為中間體1；

(2)按照摩爾份數計，將1份(2E，4E)-5-苯基-2，4-戊二烯酸與0.5～5份N-乙酰基半胱胺放入反應器中，加入500～1500份二氯乙烷，攪拌均勻，在20～25℃下反應2～5h，然后減壓蒸餾除去二氯乙烷，用硅膠柱分離后，放在TLC板上，在波長為256nm的紫外線照射下，析出的產物即為中間體2；

(3)按照摩爾分數計，將1份中間體1、1份中間體2、0.005～0.05份酮酶StlD和0.005～0.05份芳香化酶StlC放入反應器中，加入pH值為6～9的緩沖液，攪拌均勻后，在20～55℃下反應1～5h，得到反應溶液；

(4)將按體積比為1：1的乙酸乙酯萃取液和反應溶液混合后，對反應溶液進行萃取，收集有機相，并用無水氯化鈣進行干燥，經過減壓蒸餾除去乙酸乙酯后，即得苯烯莫德。

有機合成的方法按照以下路線進行反應：

在本發明中，作為進一步說明，步驟(3)所述的酮酶StlD為一種來源于細菌Photohabdus luminesces的酮酶，氨基酸序列為SQEID NO1。

在本發明中，作為進一步說明，步驟(3)所述的芳香化酶StlC為一種來源于細菌Photohabdus luminesces的芳香化酶，氨基酸序列為SQEID NO2。

本發明具有以下有益效果：

1.本發明所用的化學法和生物法相結合的工藝，能夠結合化學法和生物法的優點，進而制備高收率的苯烯莫德。化學法是成熟的酯化反應合成路線，反應得率高，反應步驟為1～2步，分離純化方便，避免了多步反應的繁瑣和產率低等問題，生物酶法是選取高表達，易于純化的高活力酶，該酶具有高轉化率，適合工業化粗放條件等優良特點。其中，關鍵的縮合步驟由生物酶完成。本發明能夠做到揚長避短，充分結合化學法和生物法的優點，所制備的苯烯莫德的總收率明顯高于單純采用化學法或者生物法所制備的苯烯莫德的收率。