[發明專利]一種昆蟲特異性多胺類小分子毒素、其純化方法及其應用

有效

• 申請號: 201710363881.7
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN107056657B
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 段志貴;梁宋平;劉凱
• 申請（專利權）人: 湖南師范大學
• 主分類號: C07C279/14
• 分類號: C07C279/14;C07C277/08;A01P7/04;A61P43/00;A61P25/08;A61P25/24;A61P25/28
• 代理公司: 長沙七源專利代理事務所(普通合伙) 43214
• 代理人: 鄭雋;周曉艷

1.一種昆蟲特異性多胺類小分子毒素的純化方法，其特征在于：所述昆蟲特異性多胺類小分子毒素的相對分子量為622.3971；其分子式為C₂₈H₅₀N₁₀O₆；

所述昆蟲特異性多胺類小分子毒素的結構式如下：

；

該純化方法包括以下步驟：

第一步、毒液的超濾，具體是：將電刺激收集到的毒液利用超濾管分離，重復多次，合并濾液，得到含有昆蟲特異性多胺類小分子毒素的非蛋白質小分子毒素混合物；毒液為大腹園蛛的毒液；所述超濾管中的超濾膜為允許3KDa以下的分子通過的半透膜；分離具體為在轉速為8000-12000rpm條件下離心8-10分鐘；重復分離三次合并濾液；

第二步、非蛋白質小分子毒素混合物的離子交換層析，具體是：將非蛋白質小分子毒素混合物采用強陽離子交換柱進行分離，得到洗脫峰；選擇經生物質譜檢測出的目標峰作為反相-高效液相層析的目標峰；強陽離子交換柱的規格為10mm×250mm，其型號為Ultimate? XB-SCX；分離具體是：利用0.1mol/LpH6.0磷酸緩沖液上樣，采用含1.2mol/L氯化鈉的0.1mol/LpH6.0磷酸緩沖液混合液梯度洗脫，洗脫流速為2mL/min，檢測波長為280nm；

第三步、反相-高效液相層析，具體是：采用C18反相柱將目標峰進行脫鹽和進一步純化，收集經過生物質譜確定的目標峰進行冷凍干燥，即得昆蟲特異性多胺類小分子毒素，其中：C18反相柱的規格為10mm×250mm，反相柱的型號為Ultimate^? XB-C18；采用洗脫液A和洗脫液B進行線性梯度洗脫，洗脫液A由質量含量為2%的乙腈、質量含量為0.1%的三氟乙酸以及去離子水混合而成；洗脫液B由質量含量為2%的去離子水、質量含量為0.1%的三氟乙酸以及色譜純乙腈混合而成，梯度洗脫，洗脫過程中的總流速為2mL/min，檢測波長為280nm。