[發(fā)明專利]一種檢測CALR基因1型突變的引物組合物及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710363814.5
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN107164473B
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 關(guān)明;曹國君;方雪恩;唐宜桂;許笑;孔繼烈;張心菊;李楊
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院;復(fù)旦大學(xué);上海速創(chuàng)診斷產(chǎn)品有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 竺路玲

1.一種檢測CALR基因1型突變的引物組合物，其特征在于，包括SEQ ID NO：2-SEQ IDNO：7所示序列的引物；

所述引物組合物還包括如SEQ ID NO：8所示序列的PNA探針，其3'末端加了2個賴氨酸。

2.一種含有權(quán)利要求1所述的引物組合物的檢測CALR基因1型突變的試劑盒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測CALR基因1型突變的試劑盒，其特征在于，還包括反應(yīng)緩沖液、Bst DNA 聚合酶、鈣黃綠素、去離子水。

4.一種用于非診斷和非治療目的的檢測CALR基因1型突變的方法，其特征在于，以被測樣本的DNA模板，采用如權(quán)利要求1所述的引物組合物進(jìn)行LAMP反應(yīng)，然后進(jìn)行可視化判讀來鑒定樣本是否為CALR基因1型突變陽性。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測CALR基因1型突變的方法，其特征在于，所述LAMP反應(yīng)的條件為：58℃-68℃，60min。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測CALR基因1型突變的方法，其特征在于，所述LAMP反應(yīng)的體系包括：2×反應(yīng)緩沖液 12.5μL，SEQ ID NO：2~SEQ ID NO：7所示序列中的每一引物各1μL，SEQ ID NO：8所示序列的PNA探針1μL，Bst DNA 聚合酶1μL，鈣黃綠素 1μL，去離子水1.5μL，DNA模板2μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測CALR基因1型突變的方法，其特征在于，SEQ ID NO：2~SEQ ID NO：3所示序列中的每一引物的終濃度均為0.2μmol/L；

SEQ ID NO：4~ SEQ ID NO：5所示序列中的每一引物的終濃度均為1.6μmol/L；

SEQ ID NO：6~ SEQ ID NO：7所示序列中的每一引物的終濃度均為1.6μmol/L；

SEQ ID NO：8所示序列的PNA探針的終濃度為0.8μmol/L。