[發明專利]一種復合微生物菌劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710363707.2
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN107177525A
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發明（設計）人: 尹坤;尹濤;孫旭生;楊國平;劉劍敏;王亞君;楊盼盼;李艷;林敏;沈世華;陳三鳳;張學賢
• 申請（專利權）人: 東莞市保得生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C05G3/00;C12R1/11;C12R1/07;C12R1/01
• 代理公司: 北京天盾知識產權代理有限公司11421
• 代理人: 林曉宏

1.一種復合微生物菌劑，其特征在于：它包括固氮類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)1-49、巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)B16和解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)T600；

所述固氮類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)1-49的保藏編號為Strain Number CGMCC NO.4966；所述巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)B16的保藏編號為Strain Number CCTCC M 2015750；所述解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)T600的保藏編號為Strain Number CCTCCM 2015756。

2.權利要求1所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：它包括以下步驟：

1)、種子培養：

先制備種子培養基A、種子培養基B，再用接種環接種1環固氮類芽孢桿菌1-49種到種子培養基A中，用接種環分別單獨接種1環巨大芽孢桿菌B16和1環解淀粉芽孢桿菌T600到兩個種子培養基B中，轉速為180-220r/min，溫度為30-34℃，搖床培養20-24h，進行擴大培養和活化，分別制得環固氮類芽孢桿菌1-49種子液、巨大芽孢桿菌B16種子液和解淀粉芽孢桿菌T600種子液；

2)、發酵培養：

先制備發酵培養基，再分別取步驟1)中制得的環固氮類芽孢桿菌1-49種子液10ml、巨大芽孢桿菌B16種子液20ml和解淀粉芽孢桿菌T600種子液10ml加入發酵培養基中并放到發酵罐中發酵，發酵培養基的pH為7.2，發酵罐的通氣量和轉速分為初期、中期和后期三個階段，初期的通氣量為25-35％，轉速為80-120r/min，中期的通氣量為40-50％，轉速為240-260r/min，后期的通氣量為25-35％，轉速為80-120r/min，制得復合微生物菌劑。

3.根據權利要求2所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述步驟1)中種子培養基A由由以下質量的原料制成：CaCO₃1.1-1.4g，MgSO₄·7H₂O 0.5-1.2g，K₂HPO₄ 1.2-2.0g，NaCl0.2-0.4g，FeSO₄·7H₂O 0.002-0.005g，NaMO₄·2H₂O 0.04-0.1g，蔗糖6-10g，蒸餾水800-1200mL，pH 7.1-7.4。

4.根據權利要求2所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述步驟1)中種子培養基B由以下質量的原料制成：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，氯化鈉5.0g，蒸餾水1000mL，pH 7.0-7.4。

5.根據權利要求2所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述步驟2)中發酵培養基由以下質量的原料制成：豆餅粉15-20g，玉米淀粉4-8g，蔗糖3-6g，酵母粉1-3g，MgSO₄·7H₂O 0.2-0.4g，CaCO₃ 1-2g，MnSO₄·H₂O 0.02-0.04g，KH₂PO₄ 0.4-0.7g，蒸餾水800-1200mL。

6.根據權利要求5所述的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述步驟2)中發酵培養基由以下質量的原料制成：豆餅粉16-28g，玉米淀粉5-6g，蔗糖4-5g，酵母粉2-3g，MgSO₄·7H₂O 0.2-0.3g，CaCO₃ 1-2g，MnSO₄·H₂O 0.03-0.04g，KH₂PO₄ 0.5-0.6g，蒸餾水1000mL。