[發明專利]基于FRET辨別DNA堿基長度及檢測單鏈DNA結合蛋白的生物傳感方法

有效

• 申請號: 201710363117.X
• 申請日: 2017-05-08
• 公開（公告）號: CN107179304B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 胡宇芳;張青青;杜春暖;王嬌;饒家佳;郭智勇;葛國平;王邃
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于熒光共振能量轉移FRET辨別DNA堿基長度并檢測單鏈DNA結合蛋白SSB的熒光傳感方法，具體步驟如下：

(1)將85～95μL濃度為3～4mM陽離子共軛聚合物CCP與0.5～2μL濃度為0.5～2mM銥配合物混合，然后加入0.05～0.15M pH6.8～7.6的PBS緩沖溶液，得到用于檢測SSB的基于CCP與銥配合物FRET效應的熒光傳感器體系；檢測熒光強度，計算CCP在415nm的熒光強度與銥配合物在530nm的熒光強度比值I₅₃₀/I₄₁₅；

(2)a.加入1～3μL 5～15μM的單鏈DNA到步驟(1)中的體系，檢測熒光強度的變化，計算CCP在415nm的熒光強度與銥配合物在530nm的熒光強度比值I₅₃₀/I₄₁₅；通過更換不同堿基數量的單鏈DNA，利用該方法辨別不同長度的DNA；b.加入1～3μL 5～15μM的發卡DNA到步驟(1)中的體系，檢測熒光強度的變化，計算CCP在415nm的熒光強度與銥配合物在530nm的熒光強度比值I₅₃₀/I₄₁₅；

其中，a部分的實驗步驟用于不同堿基數量DNA的檢測；b部分的實驗步驟用于SSB的檢測；

(3)不同濃度的SSB加入到步驟(2)中，然后加入緩沖溶液，30～40℃下溫育5～15min，檢測熒光強度的變化，計算CCP在415nm的熒光強度與銥配合物在530nm的熒光強度比值I₅₃₀/I₄₁₅，即熒光共振能量轉移效率，獲得一系列不同濃度的SSB對應的熒光強度比值，建立熒光強度比值與SSB濃度之間的定量關系；根據這個定量關系可以檢測樣品中SSB的未知濃度。

2.根據權利要求1中所述的熒光傳感方法，其特征在于：狹縫寬度為：10nm，激發波長是380nm，掃描電壓是700V，檢測CCP/DNA/銥配合物體系中CCP在415nm的熒光強度I₄₁₅與銥配合物在530nm的熒光強度比值I₅₃₀/I₄₁₅對不同濃度SSB的定量關系。