[發明專利]一種增加γ-聚谷氨酸發酵液溶氧的方法

有效

• 申請號: 201710362797.3
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN106947724B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 閆志英;姬高升;許力山;房俊楠;劉曉風
• 申請（專利權）人: 中國科學院成都生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P13/02;C12R1/07
• 代理公司: 成都坤倫厚樸專利代理事務所(普通合伙) 51247
• 代理人: 劉坤

1.一株解淀粉芽孢桿菌，Bacillus amyloliquefaciens JX-6，其特征在于：其保藏編號為：CGMCC No.13715，該菌在LB培養基中的營養細胞為桿狀，革蘭氏陽性，長2～3μm、寬0.7～0.9μm；其菌落在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基上平板培養為表面凸起，光滑無褶皺，菌落透明，邊緣呈規則圓形，菌落粘性大，挑起有絲狀。

2.一種增加γ-聚谷氨酸發酵液溶氧的方法，其特征在于：包括如下步驟：將解淀粉芽孢桿菌JX-6接種于已滅菌的斜面活化培養基，經活化培養得到活化菌種；將所述活化菌種接種于已滅菌冷卻的種子培養基中，經種子液培養得到種子液；將所述種子液接種在發酵培養基中，發酵過程中添加固態氧，發酵完成后得到發酵液；對所述發酵液進行提取、純化、透析除鹽、冷凍干燥制得含γ-聚谷氨酸的成品；所述固態氧為Na₂CO₄和CaO₂中的一種或兩者的混合物。

3. 根據權利要求2所述的增加γ-聚谷氨酸發酵液溶氧的方法，其特征在于：所述的斜面活化培養基由蛋白胨10 g/L，牛肉膏5 g/L，NaCl 5 g/L和水組成，pH 7.0～7.4；所述的活化培養為30～37℃培養24～48h。

4. 根據權利要求2所述的增加γ-聚谷氨酸發酵液溶氧的方法，其特征在于：所述的種子培養基由蛋白胨 10 g/L，牛肉膏 5 g/L，NaCl 5 g/L和水組成，pH 7.0～7.4；所述的種子液培養為30～37℃搖瓶培養24～48h。

5. 根據權利要求2所述的增加γ-聚谷氨酸發酵液溶氧的方法，其特征在于：所述的發酵培養基為E型培養基：由檸檬酸 10 g/L，谷氨酸 20 g/L，硫酸銨 10 g/L，甘油 80 g/L，K₂HPO₄ 1 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L，FeCl₃·6H₂O 0.02 g/L，MnSO₄·H₂O 0.1 g/L，CaCl₂0.2 g/L和水組成，pH 7.0。

6.根據權利要求5所述的增加γ-聚谷氨酸發酵液溶氧的方法，其特征在于：所述的發酵過程中，將所述種子液按體積分數2%～10%接種量接種于發酵培養基中，在30～37℃搖瓶培養24～48h；然后將固態氧以溶液狀態加入培養基中，添加至固態氧在發酵液中的濃度為50～500μmol/L，繼續搖瓶培養至96h，終止發酵。

7.根據權利要求6所述的增加γ-聚谷氨酸發酵液溶氧的方法，其特征在于：所述的固態氧在發酵液中的濃度為200～400μmol/L。

8.根據權利要求2所述的增加γ-聚谷氨酸發酵液溶氧的方法，其特征在于：所述的提取是用硫酸調節發酵液pH至3.0，于4800r/min下離心30min去除菌體；所述的純化是向提取的上清液中加入3倍體積的預冷無水乙醇，4℃靜置過夜，離心得γ-聚谷氨酸粗品沉淀；所述的透析除鹽是用適量的去離子水溶解粗品，調節pH值為3～4，用透析袋進行脫鹽；所述的冷凍干燥是對透析液進行真空冷凍干燥。