[發明專利]禾本科植物莖髓中內生真菌的提取方法

在審

• 申請號: 201710362496.0
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN108929853A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發明（設計）人: 邵萬均
• 申請（專利權）人: 邵萬均
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種禾本科植物莖髓中內生真菌的提取方法，將莖稈小段放入75％酒精溶液中清洗60至100秒，然后放入1％次氯酸鈉溶液中清洗30至40秒，使用清水清洗2至3次后放在無菌紙上干燥待用；將莖稈小段利用解剖刀縱向切開，使莖髓裸露；利用鑷子將莖髓取出，并放置在玻璃皿的培養基上，每個玻璃皿選擇3至4個位置放置莖髓；將玻璃皿進行密封，并放置在暗室25攝氏度的環境下培養5至6天，剔除其他微生物菌落，繼續培養滿10至15天；利用接種針將內生真菌菌落挑出進行單獨培養，獲得內生真菌菌株。相比現有技術，本發明具有真菌提取效率高、雜菌含量少、操作簡單的特點。

技術領域

本發明涉及真菌提取領域，尤其涉及一種禾本科植物莖髓中內生真菌的提取方法。

背景技術

禾本科(學名：Gramineae)別稱早熟禾科，分為620多屬，10000多種，中國有190余屬約1200種。地球陸地大約有20％覆蓋著草，禾本科包括多種俗稱作某某草的植物。但是必須指出，不是所有的草都是禾本科植物；同樣，并不是所有禾本科植物都是低矮的草，就如竹子，也可以高達十數米，連片成林。禾本科包含了許多重要的糧食作物。

內生真菌可以侵染多個禾本科植物，并產生生物堿。目前，還缺少從禾本科植物莖髓中提取內生真菌的方法。

發明內容

發明目的：針對現有技術的不足與缺陷，本發明提供一種真菌提取效率高、雜菌含量少、操作簡單的禾本科植物莖髓中內生真菌的提取方法。

技術方案：本發明所述的禾本科植物莖髓中內生真菌的提取方法，包括下述步驟，

(1)將禾本科植物植株整體取回操作室，將植株剪成5至8厘米的小段，去除莖稈外部的葉片，取莖稈部分；

(2)將步驟(1)獲得的莖稈小段放入75％酒精溶液中清洗60至100秒，然后放入1％次氯酸鈉溶液中清洗30至40秒，使用清水清洗2至3次后放在無菌紙上干燥待用；

(3)將步驟(2)獲得的莖稈小段利用解剖刀縱向切開，使莖髓裸露；

(4)利用鑷子將莖髓取出，并放置在玻璃皿的培養基上，每個玻璃皿選擇3至4個位置放置莖髓；

(5)將玻璃皿進行密封，并放置在暗室25攝氏度的環境下培養5至6天，剔除其他微生物菌落，繼續培養滿10至15天；

(6)利用接種針將內生真菌菌落挑出進行單獨培養，獲得內生真菌菌株。

其中，所述的步驟(2)中無菌紙通過預先的高溫高壓滅菌操作。

其中，所述的步驟(3)中解剖刀通過預先的高溫滅菌操作。

其中，所述的步驟(4)中鑷子通過預先的高溫滅菌操作。

其中，所述的步驟(5)中玻璃皿通過密封條進行密封。

有益效果：與現有技術相比，本發明具有以下顯著優點：本發明禾本科植物莖髓中內生真菌的提取方法真菌提取效率高、雜菌含量少、操作簡單。

具體實施方式

實施例1：

本實施例的禾本科植物莖髓中內生真菌的提取方法，包括下述步驟，

(1)將禾本科植物植株整體取回操作室，將植株剪成5厘米的小段，去除莖稈外部的葉片，取莖稈部分；

(2)將步驟(1)獲得的莖稈小段放入75％酒精溶液中清洗60秒，然后放入1％次氯酸鈉溶液中清洗30秒，使用清水清洗2次后放在預先高溫高壓滅菌的無菌紙上干燥待用；

(3)將步驟(2)獲得的莖稈小段利用預先高溫滅菌的解剖刀縱向切開，使莖髓裸露；