[發明專利]高羊茅葉片中內生真菌的提取方法

在審

• 申請號: 201710362355.9
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN108929856A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發明（設計）人: 邵萬均
• 申請（專利權）人: 邵萬均
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種高羊茅葉片中內生真菌的提取方法，將高羊茅植株的葉片取下，在無菌操作臺中放置15至20小時；將葉片放入75％酒精溶液中清洗30至45秒，然后放入0.5％次氯酸鈉溶液中清洗10至15秒，使用清水清洗2至3次后放在無菌紙上干燥待用；將葉片利用打孔器進行打孔，并將獲得的圓形葉片放置在玻璃皿的培養基上；將玻璃皿進行密封，并通過酒精燈將密封條進行融合；將玻璃皿放置在暗室25攝氏度的環境下培養10至15天，獲得內生真菌菌落；利用接種針將菌落挑出進行單獨培養，獲得內生真菌菌株。相比現有技術，本發明具有真菌提取效率高、提取存活率高、成本低的特點。

技術領域

本發明涉及真菌提取領域，尤其涉及一種高羊茅葉片中內生真菌的提取方法。

背景技術

高羊茅學名：Festuca elata Keng ex E.Alexeev，又名：羊茅，屬禾本目，禾本科多年生地被植物。按功能用途分類：分草坪型(觀賞)、牧草型(作為牧草飼養牲畜)。性喜寒冷潮濕、溫暖的氣候，在肥沃、潮濕、富含有機質、pH值為4.7～8.6的細壤土中生長良好。大量應用于運動場草坪和防護草坪。作為牧草飼養牲畜。

目前，已經在高羊茅中發現內生真菌，但還沒有對其進行提取的成熟方法。

發明內容

發明目的：針對現有技術的不足與缺陷，本發明提供一種真菌提取效率高、提取存活率高、成本低的高羊茅葉片中內生真菌的提取方法。

技術方案：本發明所述的高羊茅葉片中內生真菌的提取方法，包括下述步驟，

(1)將高羊茅植株的葉片取下，在無菌操作臺中放置15至20小時；

(2)將葉片放入75％酒精溶液中清洗30至45秒，然后放入0.5％次氯酸鈉溶液中清洗10至15秒，使用清水清洗2至3次后放在無菌紙上干燥待用；

(3)將步驟(2)獲得的葉片利用打孔器進行打孔，并將獲得的圓形葉片放置在玻璃皿的培養基上；

(4)將玻璃皿進行密封，并通過酒精燈將密封條進行融合；

(5)將玻璃皿放置在暗室25攝氏度的環境下培養10至15天，獲得內生真菌菌落；

(6)利用接種針將菌落挑出進行單獨培養，獲得內生真菌菌株。

其中，所述的步驟(3)的打孔器通過預先的高溫高壓滅菌操作。

其中，所述的步驟(3)的玻璃皿為直徑9厘米的透明玻璃皿。

其中，所述的步驟(4)中采用保鮮膜進行玻璃皿的密封。

其中，所述的步驟(6)的接種針通過預先的高溫高壓滅菌操作。

有益效果：與現有技術相比，本發明具有以下顯著優點：本發明高羊茅葉片中內生真菌的提取方法的真菌提取效率高、提取存活率高、成本低。

具體實施方式

實施例1：

本實施例的高羊茅葉片中內生真菌的提取方法，包括下述步驟，

(1)將高羊茅植株的葉片取下，在無菌操作臺中放置15小時；

(2)將葉片放入75％酒精溶液中清洗30秒，然后放入0.5％次氯酸鈉溶液中清洗10秒，使用清水清洗2次后放在無菌紙上干燥待用；

(3)將步驟(2)獲得的葉片利用預先經過高溫高壓滅菌操作的打孔器進行打孔，并將獲得的圓形葉片放置在直徑9厘米玻璃皿的培養基上；

(4)采用保鮮膜對玻璃皿進行密封，并通過酒精燈將密封條進行融合；

(5)將玻璃皿放置在暗室25攝氏度的環境下培養10天，獲得內生真菌菌落；