[發明專利]一種檢測伊氏錐蟲的引物對及其檢測方法和試劑盒

在審

• 申請號: 201710362076.2
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN107217093A
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 溫硯子;洪曉昆;賴德華;倫照榮
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/90
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 陳衛

1.一種檢測伊氏錐蟲的引物對，其特征在于，包含上下游引物PAG3-F和PAG3-R，序列分別如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

2.權利要求1所述引物對在檢測和/或鑒定伊氏錐蟲中的應用。

3.權利要去1所述引物對在制備伊氏錐蟲檢測試劑或試劑盒中的應用。

4.一種檢測伊氏錐蟲的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.提取待測樣品DNA或血液溶解液；

S2.以步驟S1所述DNA或血液溶解液為模板，利用權利要求1所述引物對進行PCR擴增反應；

S3.將擴增產物電泳檢測，若擴增出單一250bp大小的條帶，則待測樣品中含有伊氏錐蟲，反之則待測樣品中沒有伊氏錐蟲。

5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增反應體系為：引物PAG3-F和引物PAG3-R，100 ng 樣品DNA或5 μL樣品血液溶解液，2.5 Units EasyTaq DNA polymerase，1×Easy Taq Buffer，0.2 mM dNTPs、滅菌雙蒸水補齊至25 μL，引物PAG3-F和引物PAG3-R在反應體系中的終濃度分別為0.2 μM。

6.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增反應條件為：94℃ 3 min；94℃30 s，65℃10 s，共30個反應循環。

7.權利要求4～6任一項所述方法在檢測和/或鑒定伊氏錐蟲中的應用。

8.權利要求4～6任一項所述方法在制備伊氏錐蟲檢測試劑盒中的應用。

9.一種檢測和/或鑒定伊氏錐蟲的試劑盒，其特征在于，含有權利要求1所述引物對。

10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還含有PCR擴增反應所需的試劑。