[發明專利]臍帶間充質干細胞臨床凍存保護液組合物及其用途

在審

• 申請號: 201710360888.3
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN106982821A
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發明（設計）人: 朱灝
• 申請（專利權）人: 安徽瑞杰賽爾生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種臍帶間充質干細胞臨床凍存保護液組合物及其用途，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymal stem cell，MSCs)是一類來源于中胚層及外胚層的多能干細胞，具有自我更新及多向分化潛能。研究證明，間充質干細胞可分化成為脂肪細胞、平滑肌細胞、成骨細胞、軟骨細胞、肝臟細胞、神經細胞、神經膠質細胞、皮膚細胞等多種細胞類型，具有很好的損傷修復能力。間充質干細胞最早發現于骨髓，主要參與骨髓造血干細胞的定向歸巢及穩態的維持。近年來，國內外研究發現間充質干細胞除具有多向分化潛能外，還具有很好的免疫調節特性，因此而被用于諸如移植物抗宿主(GvHD)、系統性紅斑狼瘡、關節炎，自身免疫性腸炎等多種炎癥性疾病等治療，臨床應用市場巨大。

臍帶間充質干細胞是一類極具應用價值的間充質干細胞，其來源于產婦廢棄胎盤組織。相比傳統骨髓來源間充質干細胞，臍帶間充質干細胞不受個體條件影響，更具有采集方便，來源豐富，以及特性均一等特點。大量研究已嘗試應用臍帶間充質干細胞治療多種疾病，并取得了理想的療效。

將優質低代數間充質干細胞進行凍存，在必要時進行復蘇擴增是間充質干細胞臨床應用的必經程序。在凍存過程中有效保護間充質干細胞活性，保障間充質干細胞復蘇時的活率是間充質干細胞凍存保護液及操作流程在設計時考慮的最終目的。通過凍存復蘇后的臍帶間充質干細胞可作為理想的種子細胞用于衰老及病變引起的組織器官損傷修復。

現有技術中使用的間充質干細胞凍存液多含有胎牛血清，胎牛血清中富含多種細胞營養因子，可用于細胞培養及凍存，能長期保持細胞活力。然而，間充質干細胞在接觸胎牛血清時會內吞血清物質，當間充質干細胞回輸人體后可由異源蛋白引起過敏反應，在使得間充質干細胞移植后成功率降低的同時，導致不良反應的發生，嚴重的可引起過敏性休克。另外，優質胎牛血清多源于進口，價格昂貴的同時，面臨著攜帶瘋牛病病毒的風險，因此胎牛血清為或臨床使用批準，只能用于基礎科研。

公開號為CN101919378 B的中國發明專利申請，公開了一種直接靜脈應用的間充質干細胞凍存液，相關操作步驟包括:1)將人AB血置于無菌離心管中，在1000～1200rpm條件下離心15分鐘；2)吸取上清液，轉移入新的離心管中，在4000g條件下離心20分鐘，再次取出上清即為凍存用人AB血漿；3)將二甲基亞砜(DMSO)、凍存用人AB血漿、勃脈力A注射液按體積比1:3:6混合均勻，即為間充質干細胞凍存液。由該專利文件的實施例表1可見，經該凍存液I和II分別凍存細胞1、2、3個月后復蘇檢測，凍存液I的細胞活率依次為96％、92.6％和89％，其細胞活率降低率為3.5％/月，凍存液II細胞活率依次為97.4％，95％和為94.7％，其細胞活率降低率為1.35％/月，該申請公開的凍存液雖然可以直接靜脈輸注，但細胞活率維持時間較短。并且，該間充質干細胞凍存液中含有人AB血漿，其中大量成分未知，且存在個體差異，無法保證細胞凍存的標準化及穩定性，用于異體輸注存在安全隱患。另外，健康血漿來源少，成本高，難以大規模應用。

綜上所述，現有技術中的細胞凍存液難以有效維持間充質干細胞活率，且不具備臨床使用的條件。

發明內容

針對上述問題，本發明提供一種符合臨床使用要求，且能有效保證臍帶間充質干細胞活力的凍存液級凍存方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

本發明提供了一種臍帶間充質干細胞臨床凍存保護液組合物，其包括按體積百分數計的如下組分：

復方右旋糖酐40注射液：30～80％；

20wt％人血清白蛋白：10～50％；

DMSO：5～20％；

其中，所述20wt％人血清白蛋白的溶劑為生理鹽水。

作為優選方案，各所述組分的體積百分數分別為：

復方右旋糖酐40注射液： 65％；

20％人血清白蛋白： 25％；

DMSO： 10％。

一種如前述的臍帶間充質干細胞臨床凍存保護液組合物在制備臍帶間充質干細胞懸液中的用途。

作為優選方案，包括如下步驟：

利用新生兒臍帶血提取充質干細胞；

將所述充質干細胞用權利要求1所述的凍存保護液組合物進行重懸，得到的細胞懸液。

作為優選方案，還包括將所述細胞懸液進行凍存的步驟，具體為：將細胞懸液放入梯度降溫盒中，-80℃冰箱過夜，第2天放入液氮罐長期保存。