[發明專利]一種蛹蟲草多孢雜交育種的方法及其應用

在審

• 申請號: 201710360093.2
• 申請日: 2017-05-20
• 公開（公告）號: CN107173051A
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發明（設計）人: 沈中奇;李盈
• 申請（專利權）人: 天津市東方中濱農業科技有限公司
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04;C05G1/00;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 天津市尚文知識產權代理有限公司12222
• 代理人: 李寧

技術領域

本發明涉及應用生物技術原理人工培育真菌的技術領域，具體涉及蛹蟲草的培育，更具體地涉及一種蛹蟲草多孢雜交育種的方法及其應用。

背景技術

蛹蟲草（Cordyceps militaris）隸屬于真菌界（Fungi）、子囊菌門（Ascomycota）、子囊菌綱（Ascomycetes）、糞殼菌亞綱（Sordariomycetidae）、肉座菌目（Hypocreales）、麥角菌科（Clavicipitaceae）、蟲草屬（Cordyceps）。蛹蟲草是非常著名的藥食兩用的子囊真菌，也是獲得蟲草素的主要來源，具有很高的開發利用價值。近年來，隨著野生冬蟲夏草資源的日漸枯竭，其價格不斷攀升，從而促使人們尋找野生冬蟲夏草的替代品。由于蛹蟲草具有與冬蟲夏草相近的藥用與食用價值，加之蛹蟲草更容易馴化，因此受到人們越來越多的關注。

蛹蟲草的生物活性成分主要是蟲草素、蟲草酸和多糖。蟲草素是蛹蟲草的次生代謝產物，為腺苷酸類似物，是從真菌中分離出的第一個核苷酸類抗菌素，具有抑制腫瘤、抗驚厥、抗焦慮等多種藥用價值。

在相關技術中，通常都是以蛹蟲草的菌種開始培養繁殖，進而得到蟲草素、多糖和蟲草酸。常見的蛹蟲草菌種在培養過程中，首先制作固體試管種再將試管種轉接到液體培養液中，震蕩培養一定時間，得到液體母種，得到的液體母種經過擴培后或直接接種到子實體培養基繼續培養。一般而言，蛹蟲草菌種在培養生長過程中會用到固體培養基、液體培養基及子實體培養基；其中固體培養基包括：20%馬鈴薯，5%葡萄糖，3%瓊脂粉；液體培養基包括：20%馬鈴薯，2%葡萄糖，0.2%蛋白胨，0.09%磷酸二氫鉀，0.04%硫酸鎂；子實體固體培養基包括：25%大米或麥子，2.0%蛋白胨，0.07%磷酸二氫鉀，0.04%硫酸鎂。

此外，一方面，蛹蟲草就是一種退化特別快的菌種，如果培養基營養不全，就會導致產量低、退化快；另一方面，蛹蟲草的生長是一個退化的過程，是人工難以控制的。

為此，需要探索一種培育優良蛹蟲草菌種的方法，并為其生長提供營養全面的培養基，以期獲得有活力且退化慢的菌種，進而培育得到產量高、有益成分含量豐富的子實體。

發明內容

本發明提供一種蛹蟲草多孢雜交育種的方法，包括以下步驟：

1）將蛹蟲草的孢子彈射至固體培養基上，培養得到蛹蟲草的多孢菌種；

2）將所述多孢菌種轉接到斜面培養基中，培養得到斜面菌種；

3）將所述斜面菌種轉接到液體培養基上，搖床培養得到種子液。

通過本發明獲得的蛹蟲草多孢雜交菌種活力高、發菌快，可減少菌種的退化，進一步培養可獲得高產、蟲草素含量高的子實體。

進一步，步驟1）所述的固體培養基按照重量份數計，包括：馬鈴薯9-10份，葡萄糖0.9-1份，瓊脂0.6-0.8份，水50-60份。

更進一步，步驟1）所述的固體培養基按照重量份數計，包括：馬鈴薯9.4份，葡萄糖0.95份，瓊脂0.7份，水56份。

進一步，步驟2）所述的斜面培養基按照重量份數計，包括：馬鈴薯9-10份，葡萄糖0.9-1份，磷酸二氫鉀0.09-0.1份，硫酸鎂0.04-0.05份，瓊脂0.8-1份，水50-60份。

更進一步，步驟2）所述的斜面培養基按照重量份數計，包括：馬鈴薯9.5份，葡萄糖0.93份，磷酸二氫鉀0.093份，硫酸鎂0.045份，瓊脂0.82份，水56。

進一步，步驟3）所述的液體培養基按照重量份數計，包括：馬鈴薯9-10份，葡萄糖0.9-1份，蛋白胨0.4-0.5份，酵母浸粉0.4-0.5份，磷酸二氫鉀0.09-0.1份，硫酸鎂0.04-0.05份，脫脂蠶蛹粉0.09-0.1份，水50-60份，維生素B1 0.0009-0.02份。

更進一步，步驟3）所述的液體培養基按照重量份數計，包括：馬鈴薯9.5份，葡萄糖0.96份，蛋白胨0.43份，酵母浸粉0.43份，磷酸二氫鉀0.093份，硫酸鎂0.047份，脫脂蠶蛹粉0.094份，水54份，維生素B1 0.0112份。

進一步，所述培養基中的蛋白胨的總氮含量不低于13.5%，氨基酸含量不低于3%；所述培養基中的水為礦泉水或者蒸餾水，PH值為6-7。