[發明專利]黃曲霉毒素B1適配體親和毛細管整體柱的制備及應用

有效

• 申請號: 201710357035.4
• 申請日: 2017-05-19
• 公開（公告）號: CN107144657B
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發明（設計）人: 李彭;方勇;裴斐;姚遠航;劉琴
• 申請（專利權）人: 南京財經大學
• 主分類號: G01N30/60
• 分類號: G01N30/60
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 鄧麗;王偉

1.一種黃曲霉毒素B1適配體親和毛細管整體柱的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）毛細管活化：分別用1.0mol/L氫氧化鈉溶液沖洗毛細管4h，去離子水沖洗30min，1.0mol/L鹽酸溶液沖洗4h，然后再以去離子水洗至中性，在160℃下用氮氣吹干；

（2）整體柱的原位合成：首先將10~30mg CTAB溶于150~350μL無水乙醇和50~150μL去離子水的混合溶液中；然后將100~200μL TEOS和50~100μL APTES快速加入上述混合溶液中，室溫渦旋0.5~5min，然后放置在-5~5℃的水浴中超聲0.5~5min后，將混合溶液灌入上述活化處理過的毛細管中；最后，毛細管兩端以硅橡膠封口，放置于30~60℃烘箱中反應10~30h；

（3）整體柱的清洗：反應完成后，以甲醇和水充分清洗毛細管；

（4）戊二醛衍生：將含有5~20%戊二醛的磷酸緩沖溶液以5~20μL/min速率通入毛細管整體柱中，連續反應12h，然后用磷酸緩沖溶液沖洗掉殘留的戊二醛；

（5）修飾適配體：取黃曲霉毒素B1適配體，其堿基序列為：

5’-AGCAGCACAGAGGTCAGATGGTGCTATCATGCGCTCAATGGGAGACTTTAGCTG

CCCCCACCTATGCGTGCTACCGTGAA-3’，其中5'端通過C6間隔臂被-NH₂修飾；將黃曲霉毒素B1適配體制成濃度為4~8nmol/L的磷酸緩沖溶液，注入毛細管整體柱中反應8~12h，重復三次，用磷酸緩沖溶液沖洗掉未反應的適配體；最后用3~8mg/ml氰基硼氫化鈉沖洗整體柱6h，將制得的毛細管整體柱截取5 cm的長度用于之后的固相微萃取操作。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中，用于制備整體柱的石英毛細管內徑為530μm，外徑為690μm。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中，將25mg CTAB溶于225μL無水乙醇和100μL去離子水的混合溶液中，然后將150μL TEOS和80μL APTES快速加入上述混合溶液中。

4.一種權利要求1-3任一項所述方法制備得到的毛細管整體柱。

5.一種權利要求4所述毛細管整體柱在分離富集黃曲霉毒素B1中的應用。

6.根據權利要求5所述的毛細管整體柱在分離富集黃曲霉毒素B1中的應用，其特征在于，步驟如下：

（1）毛細管活化：用10~20 mmol/L Tris-HCl緩沖溶液平衡親和毛細管整體柱，將親和毛細管整體柱活化；

（2）上樣：將待測樣品溶液以10~100μL/min通入親和毛細管整體柱內；

（3）清洗：待樣品全部流經親和毛細管整體柱后，用10~20 mmol/L Tris-HCl緩沖液將柱內殘留和未被特異性捕獲的黃曲霉毒素B1淋洗下來；

（4）洗脫：用含有40~60%甲醇的Tris-HCl 緩沖溶液將被親和毛細管整體柱捕獲的黃曲霉毒素B1洗脫。