[發明專利]一種同時檢測草莓中四種真菌毒素的方法

在審

• 申請號: 201710355430.9
• 申請日: 2017-05-19
• 公開（公告）號: CN108956824A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 楊書珍;楊冰潔;彭麗桃
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

本發明公開了一種同時檢測草莓中四種真菌毒素的方法，其步驟是：（1）取適量均質后樣品，進行干燥；（2）加入提取溶劑，進行提取，得到提取液；（3）向提取液中加入無水硫酸鎂和氯化鈉，進行離心處理，取上清液進行干燥，得到干燥物；（4）將干燥物用70 % 甲醇水溶解，過0.22 μm微孔濾膜，濾液經超高效液相色譜?串聯質譜進行定性和定量測定。本發明在草莓中驗證了本發明方法的線性、靈敏度、回收率、精密度及重現性，結果表明本發明檢測方法的上述指標均良好。本發明方法為首次應用于草莓中四種真菌毒素的檢測與分析，具有快速、簡便、適用性廣，對于控制草莓果實的風險、提高食品安全性具有重要的意義。

技術領域

本發明屬于食品檢測技術領域，更具體涉及一種同時檢測草莓中四種真菌毒素的方法，該方法而適用于漿果中騰毒素(TEN)、鏈格孢烯(ALT)、鏈格孢酚單甲醚(AME)、鏈格孢酚(AOH)這四種毒素的檢測。

背景技術

草莓在生長、保藏以及售賣過程中中容易受到霉菌的污染而產生鏈格孢毒素、赭曲霉毒素A、展青霉毒素等各種真菌毒素，這些真菌毒素毒性較大，嚴重影響人們對草莓和葡萄果實的食用、以及對草莓和葡萄的加工利用，對消費者的健康具有很大的損傷，甚至威脅生命。

草莓樣品中均含有鏈格孢毒素，其中鏈格孢酚(AOH)和鏈格孢酚單甲醚(AME)檢測陽性的比例達到42％和55％。

草莓從生長、采集、貯存以及加工過程中均可能污染各種真菌并產生真菌毒素。草莓汁及其他制品的原材料均來自于草莓，一旦原材料受到真菌毒素的污染，常規的方法一般無法將其徹底去除，往往會不可避免的污染注射劑成品。

由于草莓的基質復雜，且含有多糖，多酚，維生素等，加之真菌毒素種類繁雜，含量通常為μg/kg，這樣的特點要求檢測方法必須靈敏度高，對多種毒素盡可能同時做出分析，以節省時間、成本和提高結果的全面性、可靠性。

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種同時檢測草莓中四種真菌毒素的方法，方法易行，操作簡便，該方法先對樣品進行提取凈化處理，然后采用液相色譜串聯質譜法測定樣品中多種真菌毒素的含量。本方法具有快速、適用性廣等特點。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：

一種同時檢測草莓中四種真菌毒素的方法，其步驟是：

(1)取適量均質后的草莓樣品(2±0.01g)，進行干燥；

(2)加入提取溶劑，進行提取，得到提取液；

(3)向步驟(2)提取液中加入4g無水硫酸鎂和1g氯化鈉，進行離心處理，取上清液進行干燥，得到干燥物；

(4)將步驟(3)中的干燥物用70％(v/v)甲醇水溶解，過0.22μm微孔濾膜，濾液經超高效液相色譜-串聯質譜進行定性和定量測定；可以具體檢測出草莓中的鏈格孢酚(AOH)、鏈格孢酚單甲醚(AME)、鏈格孢烯(ALT)、騰毒素(TEN)四種毒素的含量；

所述的步驟(1)中干燥方法為氮氣吹干、冷凍干燥或旋蒸中的任意一種；

所述的步驟(2)中提取溶劑為1％(v/v)乙酸的乙腈/水(80∶20，v/v)，提取方式為振蕩、渦旋、超聲中的任意一種；

所述的步驟(3)中無水硫酸鎂和氯化鈉的加入方法為QuEChERS方法；

所述的步驟(4)中的檢測方法為外標法(以鏈格孢酚(AOH)、鏈格孢酚單甲醚(AME)、鏈格孢烯(ALT)、騰毒素(TEN)作為外標進行定量)；

所述的四種真菌毒素為鏈格孢酚(AOH)、鏈格孢酚單甲醚(AME)、鏈格孢烯(ALT)、騰毒素(TEN)。