[發(fā)明專利]一種萬古霉素核酸二聚體生物傳感器、制備方法及其應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710354931.5 | 申請日: | 2017-05-19 |
| 公開(公告)號: | CN107090506B | 公開(公告)日: | 2021-02-23 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 江婷婷;彭珊珊;王娟 | 申請(專利權(quán))人: | 魯東大學(xué) |
| 主分類號: | C12Q1/6844 | 分類號: | C12Q1/6844;C12Q1/04 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 264025 山東*** | 國省代碼: | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 萬古霉素 核酸 二聚體 生物 傳感器 制備 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種萬古霉素核酸二聚體生物傳感器的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:
(1)將1mg萬古霉素和20ng核酸溶入0.5ml Tris-EDTA緩沖液中,加入1mgN-乙基-N′-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺和2μL三乙胺,冰浴反應(yīng)12hr后,產(chǎn)物經(jīng)高效液相色譜分離和質(zhì)譜確認后,收集后冷凍干燥,得萬古霉素核酸單體;
(2)將兩種不同核酸序列的萬古霉素核酸單體各2ng溶于20μL Tris-EDTA緩沖液中,4℃放置12hr,即得到0.1ng/μL萬古霉素核酸二聚體;
(3)將2mL 50mM的硝酸銀溶液、20mL 75mM的檸檬酸鈉溶液依次加入到960mL超純水中,快速攪拌后依次迅速加入3.5mL 30%雙氧水和10mL 100mM的硼氫化鈉溶液,室溫攪拌5min后可見溶液從無色迅速變?yōu)樽仙^續(xù)攪拌60min使其充分反應(yīng)即可得銀納米三角片,電鏡觀察其邊長約為20-30nm;取1mL上述溶液,加入10nmol含硫核酸,4℃攪拌反應(yīng)過夜后,12000rpm離心30min,去除上清加入1mL磷酸緩沖液;
(4)向步驟(3)制成的1mL 0.2nmol/L的銀納米三角牌中分別加入3μL5nmol/L的4-巰基苯甲酸和12μL 5nmol/L的含硫核酸單鏈,攪拌反應(yīng)1hr后,離心去除上清,向沉淀中加入1mL超純水,制成功能化的銀納米三角片。
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