[發明專利]一種人類誘導性多能干細胞專用的復蘇試劑及復蘇方法

有效

• 申請號: 201710354122.4
• 申請日: 2017-05-18
• 公開（公告）號: CN107034195B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 姚玲玲;楊敏;孟得龍;楊苗
• 申請（專利權）人: 煥生匯生物基因技術（北京）有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10
• 代理公司: 西安中科匯知識產權代理有限公司 61254
• 代理人: 韓冰

本發明公開了一種人類誘導性多能干細胞專用的復蘇試劑及復蘇方法，其中，復蘇試劑不含有動物成分，具體由以下成分組成：重組人表皮生長因子100ng?300ng、重組人血白蛋白1000ng?2000ng、β?巰基乙醇0.1ml?0.25ml、DMEM?F12培養基補足10.0ml。本發明的有益之處在于：(1)可保證人類誘導性多能干細胞具有較高的成活率(復蘇率)和較好的活性，并且保證細胞仍然保持很好的多功能性；(2)不含有動物成分，成分完全明確、可控，使用起來安全性較高；(3)復蘇方法操作方便，容易實施，可廣泛推廣使用。

技術領域

本發明涉及一種細胞的復蘇試劑及復蘇方法，具體涉及一種人類誘導性多能干細胞專用的復蘇試劑以及利用該復蘇試劑復蘇人類誘導性多能干細胞的方法，屬于細胞生物學技術領域。

背景技術

人類誘導性多能干細胞是當前干細胞研究的熱點和焦點。它可以分化成體內所有的細胞，進而形成身體的所有組織和器官。因此，人類誘導性多能干細胞的研究不僅具有重要的理論意義，而且在器官再生、修復和疾病治療方面極具應用價值。

在人類誘導性多能干細胞的研究過程中，經常會涉及到細胞凍存和對凍存的細胞進行復蘇。

一、細胞凍存

細胞凍存使用的凍存試劑有含血清和無血清兩類，由于血清具有成分復雜、質量不穩定、價格昂貴等缺點，所以無血清凍存和復蘇技術成為發展的趨勢。

對細胞進行凍存操作時，一般是將細胞懸浮在凍存試劑中，然后采用梯度降溫的方法降溫，降溫速度大約是1℃/min。

二、細胞復蘇

目前，對凍存的細胞進行復蘇時，一般是將凍存管直接置于37℃迅速解凍，然后加入完全生長培養基重懸細胞，離心棄上清后，再加入完全生長培養基繼續培養，以供后續的研究或測試使用。

結合上述無血清凍存和復蘇技術對細胞進行凍存和復蘇，細胞凍存后復蘇率遠低于含血清的凍存技術。所以，一些細胞復蘇試劑應運而生。但是，現有的細胞復蘇試劑還存在以下兩方面的問題：

(1)一種復蘇試劑只適用于一種細胞，或者只適用于少數幾種相似的細胞，通用性較差；

(2)細胞復蘇后，復蘇成活率(復蘇率)較低，并且活性較差。

對于人類誘導性多能干細胞，目前還沒有專門的復蘇試劑，并且在復蘇操作中使用的其他細胞復蘇試劑還含有動物成分，使用起來不夠安全。

發明內容

為解決現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種人類誘導性多能干細胞專用的復蘇試劑及復蘇方法，該專用的復蘇試劑及復蘇方法不僅可保證人類誘導性多能干細胞具有較高的成活率(復蘇率)和較好的活性，而且可保證細胞仍然保持很好的多功能性，同時不含動物成分、安全可靠。

為了實現上述目標，本發明采用如下的技術方案：

一種人類誘導性多能干細胞專用的復蘇試劑，其特征在于，不含有動物成分，具體由以下成分組成：

利用前述的復蘇試劑復蘇人類誘導性多能干細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

Step1：將15mL離心管和權利要求1前述的復蘇試劑都置于4℃平衡，將水浴鍋溫度調至37℃；

Step2：將細胞凍存管從液氮中取出，然后浸入37℃水浴鍋內，輕輕的晃動凍存管，當凍存管內的冰核達到黃豆大小的時候，取出凍存管，用酒精棉擦拭管體，然后轉移到超凈工作臺內；

Step3：在冰上打開凍存管的管蓋，輕柔的將凍存管內的細胞懸液吸取出來，轉移到一個預冷的15mL離心管內，然后緩慢加入8mL權利要求1前述的復蘇試劑，邊加邊輕搖混勻，滴加完之后蓋上管蓋，輕輕地上下顛倒混勻；