[發(fā)明專利]一組氨基酸標(biāo)志物在急性腎損傷診斷試劑盒中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710353982.6
• 申請日: 2017-05-18
• 公開（公告）號: CN108956790A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張鳳;陶霞;陳萬生;朱桑;夏天一;翟健秀;龔曉斌;高守紅;王清華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 上海順華專利代理有限責(zé)任公司 31203
• 代理人: 陸林輝

本發(fā)明涉及疾病診斷試劑盒領(lǐng)域，具體是一組氨基酸標(biāo)志物在制備急性腎損傷診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，所述的氨基酸標(biāo)志物選自犬尿氨酸，馬尿酸和氧脯氨酸中的一種或兩種以上。本發(fā)明提出的3個氨基酸標(biāo)志物能夠在急性腎損傷早期準(zhǔn)確診斷疾病的發(fā)生，單獨用于診斷急性腎損傷時AUC值均大于0.7，診斷區(qū)分效果較好。其中犬尿氨酸和馬尿酸診斷能力優(yōu)于臨床常用腎功能標(biāo)志物肌酐以及早期診斷標(biāo)志物NGAL，上述3個氨基酸對AKI的診斷時間均早于臨床腎功能標(biāo)志物尿素氮。本發(fā)明提供的靶向氨基酸代謝組學(xué)檢測方法能夠同時實現(xiàn)多個氨基酸的定量分析，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疾病診斷試劑盒領(lǐng)域，具體地說，是三種氨基酸標(biāo)志物在急性腎損傷診斷試劑盒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

急性腎損傷(AKI)是腎臟結(jié)構(gòu)和功能受損的一種疾病狀態(tài)，以突發(fā)和持續(xù)的腎功能下降為特征，是由不同病因?qū)е碌摹⑸婕叭砀飨到y(tǒng)癥狀的臨床綜合征。輕度的腎損傷可以在一段時間后自行恢復(fù)，即便AKI患者得到明顯緩解，其長期心血管風(fēng)險仍會增加。重度AKI患者損傷進展至腎衰竭時必須接受透析治療。2013年我國約有290萬住院患者罹患AKI，死亡率約24％。AKI的發(fā)生增加了住院患者醫(yī)療費用和死亡率，同時造成醫(yī)療資源的浪費。

改善全球腎臟病預(yù)后組織2012制定的臨床實踐指南(KDIGO指南)中以血肌酐和尿量為標(biāo)準(zhǔn)，將AKI定義為以下任一情況的發(fā)生，SCr 48小時內(nèi)升高達≥0.3mg/dL(26.5μmol/L)；或Scr在7天內(nèi)升高達基礎(chǔ)值的≥1.5倍；或尿量＜0.5mL/kg/h持續(xù)6小時。腎小球濾過率的快速下降能夠通過SCr升高和尿量減少反應(yīng)，其診斷效果已得到廣泛驗證。然而，血肌酐水平變化較為遲緩，尿量對腎小球濾過率的評估受血容量影響較大，基于血肌酐和尿量的變化很難做到早期發(fā)現(xiàn)和準(zhǔn)確評價腎損傷。研究表明急性腎損傷后腎臟的損傷是可以逆轉(zhuǎn)的，早期的AKI診斷能夠準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)AKI患者使其得到及時的干預(yù)治療，降低腎臟的損傷程度。發(fā)掘新的AKI早期預(yù)警標(biāo)志物有助于解決目前AKI的診斷不足，使病人在疾病早期就能夠被發(fā)現(xiàn)。

隨著基因組學(xué)、蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)的發(fā)展，AKI早期診斷標(biāo)志物的發(fā)掘研究不斷深入。目前發(fā)現(xiàn)的AKI早期預(yù)警標(biāo)志物多為腎小管損傷時表達和分泌的特定蛋白，其中中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白(NGAL)報道較多，在實驗動物和臨床病人中均表現(xiàn)出較好的診斷作用且時間早于傳統(tǒng)標(biāo)志物肌酐，但其檢測方法較肌酐等小分子標(biāo)志物更為復(fù)雜，多采用酶聯(lián)免疫法進行檢測。該方法靈敏度和特異性較高，但操作過程繁瑣檢測時間長，且基質(zhì)中的代謝物可能與抗體出現(xiàn)交叉反應(yīng)干擾測定結(jié)果。

腎臟參與體內(nèi)多種氨基酸的代謝與排泄過程，體內(nèi)氨基酸水平受到腎臟功能的調(diào)節(jié)，腎臟功能受到損傷時常發(fā)生氨基酸代謝紊亂。近年來研究發(fā)現(xiàn)，多種氨基酸水平與腎臟疾病患者的腎功能和預(yù)后顯著相關(guān)，如非對稱二甲基精氨酸、對稱二甲基精氨酸、S-腺苷同型半胱氨酸等。由此可見，完整的腎功能在維持氨基酸循環(huán)水平中發(fā)揮重要作用，氨基酸作為代謝鏈終端的小分子代謝物可能成為AKI早期診斷的一個新的目標(biāo)群體。應(yīng)用靶向氨基酸代謝組學(xué)技術(shù)發(fā)掘有效的氨基酸標(biāo)志物對于臨床早期快速診斷急性腎損傷具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的第一目的在于提供3個可以用于診斷急性腎損傷的氨基酸標(biāo)志物；本發(fā)明的第二目的在于提供一種能夠同時定量所述氨基酸標(biāo)志物的分析方法。上述目的是通過以下技術(shù)方案得以實現(xiàn)：一組用于診斷急性腎損傷的的血漿氨基酸標(biāo)志物，包括犬尿氨酸，馬尿酸和氧脯氨酸。一種定量分析所述氨基酸標(biāo)志物的方法，通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對所述氨基酸標(biāo)志物進行定量分析，該方法具有高通量和高靈敏度的特點能夠滿足生物樣本中代謝物的定量檢測。

本發(fā)明的第一方面，提供一組用于診斷急性腎損傷的血漿氨基酸標(biāo)志物，包括犬尿氨酸，馬尿酸和氧脯氨酸。

本發(fā)明的第二方面，提供一組氨基酸標(biāo)志物在制備急性腎損傷診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用，所述的氨基酸標(biāo)志物選自犬尿氨酸，馬尿酸和氧脯氨酸中的一種或兩種以上。