[發(fā)明專利]一種用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710352458.7
• 申請(qǐng)日: 2017-05-18
• 公開（公告）號(hào): CN107236699A
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏一方;何強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢博士德生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11212
• 代理人: 楊立,陳璐

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域，更特別地，涉及一種用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基及其應(yīng)用，還涉及一種貼壁培養(yǎng)MDCK細(xì)胞的方法以及由此得到MDCK細(xì)胞培養(yǎng)物。

背景技術(shù)

MDCK細(xì)胞系(MDCK Cell Lines)由Madin和Darby于1958年從美國Cocker Spaniel母曲架犬的腎臟組織分離培育建立，通常是以貼壁方式生長(zhǎng)的上皮樣細(xì)胞。MDCK細(xì)胞系廣泛用于多種病毒的擴(kuò)增和純化，如：呼腸孤病毒、腺病毒、犬細(xì)小病毒、貓粒細(xì)胞缺乏癥病毒及禽流感病毒等。由于其病毒感染效率高、增殖快，且不易變異，MDCK細(xì)胞系被公認(rèn)為最適于甲、乙型流感病毒疫苗生產(chǎn)的3種細(xì)胞系之一。

傳統(tǒng)的MDCK細(xì)胞培養(yǎng)大多采用有血清貼壁培養(yǎng)方式。血清的應(yīng)用也存在許多問題：易受病毒、支原體或其他病原體的污染；批間差異造成產(chǎn)品批次間的質(zhì)量難以嚴(yán)格控制；大量血清蛋白的存在增加了下游分離純化的難度，部分蛋白難以通過分離純化手段徹底去除，影響了產(chǎn)品的最終質(zhì)量；此外，血清來源困難、價(jià)格昂貴，大規(guī)模動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中使用血清將會(huì)大大增加生產(chǎn)成本。然而，如果培養(yǎng)基中不加血清，則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞無法貼壁。此外，現(xiàn)有的培養(yǎng)基培養(yǎng)的MDCK細(xì)胞即便在同一批次中也是形態(tài)不一，鋪展不完全，并且細(xì)胞內(nèi)部折光性差，沉淀顆粒較多。

因此，需要一種新的培養(yǎng)基用于培養(yǎng)MDCK細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容

為解決以上問題，本發(fā)明提供了一種用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基，其在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上包含了貼壁誘導(dǎo)組分，所述貼壁誘導(dǎo)組分由以下物質(zhì)組成：氫化可的松、胰島素、前列腺素E1、轉(zhuǎn)鐵蛋白、三碘甲狀腺原氨酸。

進(jìn)一步地，所述貼壁誘導(dǎo)組分由以下物質(zhì)組成：1-10×10^-8mM氫化可的松、1-10μg/mL胰島素、1-10×10^-8mM前列腺素E1、1-10μg/mL轉(zhuǎn)鐵蛋白、1-10×10^-12mM三碘甲狀腺原氨酸。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12培養(yǎng)基。

在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述細(xì)胞為MDCK細(xì)胞。

本發(fā)明還提供了上述培養(yǎng)基在貼壁培養(yǎng)MDCK細(xì)胞中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種貼壁培養(yǎng)MDCK細(xì)胞的方法，其包括使用上述培養(yǎng)基培養(yǎng)MDCK細(xì)胞的步驟。

本發(fā)明還提供了一種MDCK細(xì)胞培養(yǎng)物，其通過上述方法得到。

本發(fā)明的培養(yǎng)基中不含血清，但是仍然具有誘導(dǎo)細(xì)胞貼壁的功能，并且尤其適合用于貼壁培養(yǎng)MDCK細(xì)胞，培養(yǎng)得到的貼壁細(xì)胞形態(tài)完整，呈現(xiàn)明顯的上皮細(xì)胞樣，細(xì)胞折光性好，內(nèi)部無明顯的顆粒沉淀物，可在疫苗研究中發(fā)揮更大的作用。

附圖說明

圖1為分別使用實(shí)施例1-4和傳統(tǒng)培養(yǎng)基培養(yǎng)的MDCK細(xì)胞貼壁后的顯微照片。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。

1.無血清培養(yǎng)基的配制

本發(fā)明的培養(yǎng)基通過將表1所示的成分添加至DMEM/F12培養(yǎng)基中配制得到。

表1 向DMEM/F12培養(yǎng)基中添加的成分