[發明專利]一種檢測阿爾茨海默病外周血蛋白標志物的診斷試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201710352287.8
• 申請日: 2017-05-18
• 公開（公告）號: CN107238711B
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 程灶火
• 申請（專利權）人: 無錫市精神衛生中心
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/533
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 殷紅梅;張仕婷

本發明涉及一種檢測阿爾茨海默病外周血蛋白標志物的診斷試劑盒及其檢測方法，屬于體外診斷檢測技術領域。該檢測法的特征是能夠一次性檢測同一個樣品中的多種蛋白標志物，即通過液相芯片的制備，形成“生物素標記的檢測抗體?阿爾茨海默病蛋白標志物?捕獲抗體?微球”的四聯復合體，將四聯復合體與鏈霉親和素?藻紅蛋白結合后，可檢測出不同微球的熒光信號，從而確定待檢測樣品中各種阿爾茨海默病相關蛋白標志物的存在及含量。本發明還公開了該診斷試劑盒的組成成分。本發明所述的方法及試劑盒具有高靈敏度、高通量性、檢測快速、準確等優點，能夠對多種阿爾茨海默病相關蛋白標志物同時進行定性和定量檢測。

技術領域

本發明涉及一種檢測阿爾茨海默病外周血蛋白標志物的診斷試劑盒及其檢測方法，屬于體外診斷檢測技術領域。

背景技術

阿爾茨海默病(AD)是一種起病隱匿的進行性發展的神經系統退行性疾病。臨床上以記憶障礙、失語、失用、失認、視空間技能損害、執行功能障礙以及人格和行為改變等全面性癡呆表現為特征，病因迄今未明。由于阿爾茲海默是一種發病進展緩慢，隨著時間不斷惡化且不可逆的中樞神經系統退行性疾病，患者通常會從早期的近期記憶減退發展到喪失身體機能，最終導致死亡。AD不但直接威脅生命，還造成生活質量嚴重下降，連帶的勞動力喪失和護理成本更是不可計量；加上近十年來，針對AD治療的十項大型III期臨床試驗均告失敗，對于AD的藥物研發來說更是雪上加霜。因此，近年來AD的研究方向逐漸轉向了臨床前期AD，科研人員希望通過在出現AD癥狀前找到能提示AD的生物標志物，從而開發預防和減緩AD的藥物干預措施。AD的生物標志物(以下簡稱為“AD標志物”)不僅能夠準確診斷阿爾茨海默病，還能指導臨床治療和療效的監測，判斷阿爾茨海默病的預后。

目前已有腦脊液中β-淀粉樣蛋白(Amyloid-β)和微管相關蛋白(Tau)作為AD的公認生物標志物，但是由于其需要侵入性采樣手段，在臨床應用有限。因此，各種不同類型的血清AD標志物的聯合并行檢測已成為必然，而多指標并行檢測的高通量迅速性、準確性和穩定性就更加至關重要。

目前，對于AD標志物的測定已有多種檢測方法，包括免疫熒光分析、酶聯免疫分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)、磁分離酶聯免疫分析(EIMA)等。但是這些技術一次只能針對一種標志物進行檢測，且操作繁瑣、靈敏度較差，不能真正滿足臨床診斷檢測的需要。而固相生物芯片技術存在著可重復性差、靈敏度不夠好以及操作繁瑣等缺點。

液相芯片技術(xMAP))是一種可廣泛應用于蛋白質、基因、受體/配體等多種生物反應的生物芯片技術平臺，主要包括微球、探針分子、被檢測物和報告分子四種成分。在微球的制造過程當中，摻入了兩種不同的紅色分類熒光，根據這三種熒光的比例不同，把球形基質分為500種，可以標記上500種不同的探針分子，能同時對一個樣品中多達500種不同的目標分子進行檢測。反應過程中，探針和報告分子都分別與目標分子特異性結合。反應結束后，使單個的微球通過檢測通道，使用紅、綠雙色激光同時對微球上的紅色分類熒光和報告分子上的綠色報告熒光進行檢測，可確定所結合的檢測物的種類和數量。

本發明基于液相芯片技術的高靈敏度、高通量、檢測迅速等突出優點，對AD的多種外周血蛋白標志物進行并行檢測，能夠在臨床檢測上得到更好的應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測阿爾茨海默病外周血蛋白標志物的診斷試劑盒及其檢測方法，該檢測方法及試劑盒包括針對Complement C4、SAP、BDNF、Cathepsin D、NCAM、PAI-1、AGT、OPN和sSOD2等九種AD標志物的聯合并行檢測，具有高靈敏度、高特異性、穩定性好、檢測迅速等優點。

本發明的技術方案，一種檢測多種阿爾茨海默病相關蛋白標志物的診斷試劑盒，主要包括以下組分：