[發明專利]一種甲基營養型芽孢桿菌及其生防菌劑和應用

有效

• 申請號: 201710349281.5
• 申請日: 2017-05-17
• 公開（公告）號: CN107058183B
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 尹向田;魏彥鋒;楊陽;王珊
• 申請（專利權）人: 山東省葡萄研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

技術領域

本發明涉及葡萄白腐病防治技術領域，特別是涉及一種甲基營養 型芽孢桿菌及其生防菌劑和應用。

背景技術

葡萄白腐病在全國葡萄產區均有發生，是葡萄的主要病害之一。 葡萄白腐病主要為害果穗，也可侵染枝蔓和葉片。初在穗軸和果梗上 產生水浸狀、不規則的斑點，擴大后終至組織腐敗壞死，果粒發病， 多在基部開始，初呈淺褐色斑，迅速擴展至整個果粒，后期果粒腐爛、 脫落。葉片受害多從葉尖、葉緣開始，初形成褐色、水浸狀斑，后期 病組織上出現灰白色小粒點。

葡萄白腐病是由白腐盾殼霉(Coniothyrium diplodiella)侵染 引起的，無性生殖產生分生孢子，分生孢子褐色、單胞，半透明、光 滑、卵形，一端稍尖或鈍圓，另一端平截，內含一至多個油球。

目前，葡萄白腐病的防治多采用農業措施與藥劑防治相結合的策 略，生物防治研究較少。生物防治是利用有益的生物或其代謝產物防 治有害生物的方法，對人畜安全、對環境和果品沒有污染，對有害生 物不產生抗性。葡萄不論作為鮮食還是加工，綠色無公害是非常必要 的。

芽孢桿菌以其繁殖速度快、抗逆性強等優勢逐漸成為生物防治的 熱點。已報道過的關于葡萄白腐病生物防治的微生物主要有枯草芽孢 桿菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢桿菌等。

甲基營養型芽孢桿菌是一類極具優勢生防潛力的菌株。有研究報 道，甲基營養型芽孢桿菌可以防治由炭疽菌屬(Colletotrichum)、 絲核菌屬(Rhizoctonia)等引起的病害。并研究發現該菌有促進植 物生長的作用。但尚未見甲基營養型芽孢桿菌對由白腐盾殼霉 (Coniothyrium diplodiella)引起的葡萄白腐病防治的報道。

發明內容

本發明就是針對上述存在的缺陷而提供一種甲基營養型芽孢桿 菌及其生防菌劑和應用。本發明針對現有技術中對于葡萄白腐病的生 物防治研究欠缺，提出的甲基營養型芽孢桿菌GSBM05，對多種植物 病原菌具有廣譜抗性，對葡萄白腐病、葡萄炭疽病等多種病害具有良 好的防治效果。對葡萄植株安全，大規模生產成本低，操作方便，防 治效果穩定，能有效解決葡萄病害農藥防治所帶來的農藥殘留和環境 污染問題。對葡萄病害的生物防治方面具有巨大的應用潛力，為研制 和開發微生物農藥提供了新資源。

本發明的一種甲基營養型芽孢桿菌及其生防菌劑和應用技術方 案為，本發明公開了一株防治葡萄白腐病的甲基營養型芽孢桿菌菌 株。該菌株保藏名稱為甲基營養型芽孢桿菌GSBM05，保藏于中國微 生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北 京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期：2017年1月10日，保 藏編號：13556。

所述的甲基營養型芽孢桿菌對葡萄植株安全。

所述的甲基營養型芽孢桿菌在防治葡萄白腐病、葡萄炭疽病、葡 萄穗軸褐枯病菌、葡萄枝枯病菌、楊樹水泡潰瘍病菌、楊樹腐爛病菌 方面的應用。尤其是在防治葡萄白腐病方面的應用優勢明顯。

將甲基營養型芽孢桿菌Bacillus methylotrophicus GSBM05制備 成生防菌劑。

一種甲基營養型芽孢桿菌生防菌劑，所述甲基營養型芽孢桿菌生 防菌劑包括甲基營養型芽孢桿菌發酵液或發酵液濾液，發酵液濾液的 制備步驟如下：

(1)活化菌株：將保存好的甲基營養型芽孢桿菌GSBM05于NA培養 基中劃線并置于28℃培養箱中24h；

(2)制備種子液：挑取NA培養基上的GSBM05單菌落接種到NB液體 培養基中，28℃下180r/min震蕩培養24h；

(3)制備發酵液：按體積比以5％接種量將步驟(2)中制備的GSBM05 種子液接種于發酵培養基中，培養基初始pH為6.5、發酵溫度為28℃、 震蕩頻率為150r/min、發酵時間為60h；經平板計數，菌液濃度大于 2.0×10¹⁰cfu/mL；

(4)制備發酵液濾液：將步驟(3)中制備得到的GSBM05發酵液在 10000r/min下離心20min，取上清液，經直徑為0.22um的微孔濾膜 過濾得到發酵濾液。

所述步驟(3)中微生物菌劑的發酵培養基為：淀粉20g/L、大 豆餅粉5g/L、酵母提取物20g/L、NaCl 5g/L、CaCO₃ 2g/L，初始pH6.5。

所述的一種甲基營養型芽孢桿菌GSBM05微生物菌劑在防治鮮食 葡萄白腐病上的應用。