[發(fā)明專利]誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為成骨細(xì)胞的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710348517.3
• 申請日: 2017-05-17
• 公開（公告）號: CN107129969B
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何靜;吳方;姚瑞娟;郭江龍;吳堯
• 申請（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 成都虹橋?qū)＠聞?wù)所(普通合伙) 51124
• 代理人: 梁鑫;高蕓

1.誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為成骨細(xì)胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、構(gòu)建多孔磷酸鈣支架；所述磷酸鈣支架的力學(xué)強(qiáng)度要求≥50kPa；孔隙率10～90％；孔徑10～500μm；所述的磷酸鈣支架為磷酸鈣陶瓷支架或磷酸鈣涂層支架中的一種；所述磷酸鈣為磷酸二氫鈣、磷酸三鈣、羥基磷灰石、磷酸四鈣或雙相磷酸鈣中的至少一種；

b、在步驟a的支架上復(fù)合膠原，形成磷酸鈣-膠原纖維網(wǎng)絡(luò)；所述的膠原為I型膠原，膠原濃度為1～15mg/ml，膠原的pH值為4～6.5；

c、將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種于步驟b中所述的磷酸鈣-膠原纖維網(wǎng)絡(luò)中預(yù)培養(yǎng)4～48小時(shí)后，加入成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，得到成骨細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為成骨細(xì)胞的方法，其特征在于：步驟b中所述的膠原濃度為7～9mg/ml，pH值為5～6.5。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為成骨細(xì)胞的方法，其特征在于：步驟b中所述的復(fù)合膠原的操作為：采用物理吸附的方法將膠原直接復(fù)合在磷酸鈣支架表面，在室溫下風(fēng)干12～36小時(shí)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為成骨細(xì)胞的方法，其特征在于：步驟b中所述的磷酸鈣-膠原纖維網(wǎng)絡(luò)中纖維直徑為50～600nm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為成骨細(xì)胞的方法，其特征在于：步驟c中所述的預(yù)培養(yǎng)時(shí)間為4～24小時(shí)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為成骨細(xì)胞的方法，其特征在于：步驟c中所述的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成主要為：地塞米松10^-5～10^-2mmol/L，β-甘油磷酸鈉5～20mmol/L，抗壞血酸0.02～0.05mmol/L。