[發明專利]香椿離體組織快速繁殖的方法

在審

• 申請號: 201710348440.X
• 申請日: 2017-05-17
• 公開（公告）號: CN107006372A
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 代燚;秦利軍;曹娟;涂家寬;陳大榮
• 申請（專利權）人: 代燚
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 錢學宇

技術領域

本發明涉及林業生物技術領域，具體而言，涉及香椿離體組織快速繁殖的方法。

背景技術

香椿[Toona sinensis(A.Juss)Roem]屬楝科多年生落葉喬木，喜陽光，適宜生長在晝夜溫差大及肥沃的沙質土壤中。香椿原產我國中部，目前在全國很多地方已大面積栽培，主要分布在黃河流域和長江流域之間，尤以河北、山東栽種最多。香椿生長迅速、樹干通直且材質花紋美觀，既可用作速生材，又是上等的木生蔬菜，具有很高的營養價值、藥用價值和食療價值；另外，香椿的芽和種子等也可作為工業原料。

香椿葉浸提液活性成分的分析結果表明，其含有多種生物活性物質，包括沒食子酸(gallic acid)、蘆丁(rutin)、槲皮苷(quercitin)、兒茶酚(catechin)、表兒茶酚(epicatechin)、棕櫚酸(palmitic acid)、油酸(oleicacid)、亞油酸(linoleic acid)、亞麻酸(linolenic acid)、β-谷甾醇混合物(a mixture of β-sitosterol)、豆甾醇(stigmasterol)、β-谷甾醇糖苷(β-sitosteryl-glucoside)、櫚酸乙酯(ethyl gallate)、二十碳酸乙酯、正二十六烷醇、槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、5,7-二羥基-8-甲氧基黃酮、楊梅素、楊梅苷等，這些化合物具有較高的藥用與保健價值。

此外，香椿作為我國傳統的名貴木本蔬菜，除了色香味俱佳外，還含有豐富的營養成分。據報道，1kg香椿嫩芽含蛋白質98g、脂肪8g、糖類72g、胡蘿卜素90mg、維生素B₁ 12mg、維生素B₂ 1.3mg、維生素C 1.15g、鈣1.1g、磷1.2g以及鐵34mg。香椿所含營養成分居西紅柿、甜椒、黃瓜、大白菜、甘藍、菠菜、芹菜、蘿卜、胡蘿卜等主要蔬菜之首。同時，香椿芽可鮮食、炒食、涼拌、油炸、腌制以制作成不同的食品，深受廣大群眾喜愛。

雖然香椿作為食材兩用的優良樹種具有重要的經濟價值，但在自然條件下，人們通常用播種、扦插育苗、埋根、分蘗等無性繁殖方法進行香椿的繁殖。然而，這些方法往往具有繁殖系數低、速度慢等缺點。同時，香椿芽生產受季節性影響明顯，采收期短，僅限于春季的采收，因此傳統的栽培生產很難滿足生產需要，不利于快速繁殖和優良品種的選育推廣栽培。

植物生物技術的發展，尤其是細胞工程和基因工程理論和實踐的突破，為快速繁殖優良品種、改良品種和培育新品種提供了新的途徑。其中，植物組織培養是快速繁育良種的重要策略手段之一。植物組織培養的理論依據是植物細胞的全能性。1902年，德國植物學家Gottlieb Haber landt提出了離體細胞培養的概念，并首次將分離的完全分化的細胞進行了組織培養試驗。之后Skoog和Miller提出了激素控制器官形成的概念，使植物組織培養再生體系建立的研究達到了一個新水平。

目前，植物組織培養的應用和研究主要涉及到花卉、藥用植物、農林蔬菜等方面。木本植物由于普遍存在生長周期較長，體細胞中含有較多的多酚類物質易導致植物材料褐化，短期經濟效益較低，科研難度較大等現象，其組織培養研究相對較少。香椿作為我國特有的木本類蔬菜植物具有重要的開發及應用價值，盡管國內已有一些學者對其離體培養及快速繁殖進行了研究，但香椿在離體快繁中通常會出現愈傷分化困難，褐化嚴重，分化芽再生植株不易，移栽存活率低的問題。因此本研究以涼都香椿為材料，經過長期研究，探索了一種適于香椿的組織再生培養技術，可為推動地區產業化經濟發展提供參考。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種香椿離體組織快速繁殖的方法，本發明方法能夠有效解決香椿傳統育種過程中周期長、繁育系數低、耗時費力等技術問題，為香椿的快速繁殖、良種培育提供理論保障。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種香椿離體組織快速繁殖的方法，所述方法包括如下步驟：

a)無菌外植體獲取

將香椿種子沖洗后浸種，然后消毒，播撒于種子萌發培養基中進行培養，得到無菌幼苗，然后將無菌幼苗進行剪切處理，分別得到無菌幼苗葉片切塊以及無菌幼苗下胚軸切段；

摘取香椿新發幼葉以及新發幼嫩枝條，并沖洗、消毒，然后分別進行剪切處理，分別得到成熟組織葉塊以及成熟組織莖段；

b)愈傷誘導及植株再生