[發明專利]一株高耐受茶樹精油的康寧木霉TK13

有效

• 申請號: 201710348354.9
• 申請日: 2017-05-17
• 公開（公告）號: CN107267397B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 余波;傅科鶴;范莉莉;杜尚廣;鄒新建
• 申請（專利權）人: 南昌師范學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/885
• 代理公司: 南昌大牛知識產權代理事務所(普通合伙) 36135
• 代理人: 喻莎

本發明公開了一株高耐受茶樹精油的康寧木霉TK13。它來源于互葉白千層的內生真菌，分離自松油醇?4型互葉白千層根部，屬于半知菌門?絲孢目?木霉屬的康寧木霉。該菌株對茶樹精油具有明顯抗性，在含有0.1％茶樹精油的培養基上生長速度能夠達到對照(不含精油的培養基)的90％，這一研究發現對進一步開展茶樹精油的抑菌機理研究和今后開展產業化生產有重要的參考價值。

技術領域

本發明屬于微生物領域，涉及木霉菌株。

背景技術

互葉白千層枝葉提煉的茶樹精油(以下簡稱：精油)是一種廣譜的殺菌劑，具有抑菌、環保、溫和天然清香、無污染無腐蝕、滲透性和生物降解力強等特性，被廣泛應用化妝、醫藥、食品等行業，具有較高經濟價值。從互葉白千層中篩選耐受內生真菌后，通過與精油敏感型菌株進行比較基因組學研究，有助于揭示精油殺菌機理，有望今后對內生抗性菌株進行基因挖掘與改造，從而提高殺菌效果和產精油量。

發明內容

本發明的目的是提供一株高耐受茶樹精油的康寧木霉TK13。

本發明康寧木霉TK13(Trichoderma koningii)，屬于半知菌門，絲孢目，木霉屬。于2016年10月8日保藏于中國武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏號為：CCTCCM2016544。

本發明菌株在PDA平板上生長迅速，在28℃恒溫培養箱培養2d即產孢，3d菌落直徑能夠達到8cm。(詳見圖1：菌株Ml10在PDA平板形態與分生孢子形態)。

(1LPDA培養基配制方法：稱取去皮土豆200g，切成小塊放到800ml水中煮30min,3層紗布過濾，取液體，加入20g葡萄糖，溶解，加入瓊脂粉14g，定容至1L。)

本發明菌株對茶樹精油有明顯抗性：(1)能夠在含0.2％茶樹精油的PDA平板上生長。對精油耐受的IC₅₀達到3μl/mL。(2)在含有0.1％茶樹精油的培養基上生長速度，能夠達到對照的90％(對照為空白對照，即未加精油)。這一發現對進一步研究茶樹精油的抑菌機理有重要參考價值。該菌株具有非常好的進一步開發利用前景。

附圖說明

圖1康寧木霉TK13在PDA平板形態(A)與分生孢子形態(B)(B中標尺為5μm)

圖2康寧木霉TK13對不同濃度的精油耐受的能力

注：CK為對照組，即未加精油組，1為0.55ul/ml，2為1.10ul/ml，3為1.65ul/ml，4為2.20ul/ml

圖3碳源對康寧木霉TK13耐受精油能力的影響

圖4氮源對康寧木霉TK13耐受精油能力的影響

圖5pH對康寧木霉TK13耐受精油能力的影響

圖6自提精油與市售精油對內生真菌耐受能力的影響

具體實施方式

實施例1：互葉白千層內生真菌康寧木霉TK13分離純化與鑒定

分別取互葉白千層(采自江西省撫州市)的根、莖、葉部位，用清水洗凈后置于紗布上晾干；在無菌操作臺上，將根、莖、葉浸沒于裝有20％次氯酸鈉的培養皿中2min，然后轉移至無菌水中漂洗1min，再轉至70％酒精30s，最后無菌水漂洗1min；表面消毒處理后的樣品轉至無菌濾紙，吸干水分后剪成1立方厘米大小的組織塊，接種于含抗生素的孟加拉紅培養基上，每皿間隔放置10個樣品，28℃倒置培養，及時將生長的菌轉移至新的培養基。

孟加拉紅培養基：1L體系，蛋白胨5.0g，KH₂PO₄·3H₂O 1.0g，MgSO4·7H₂O 0.5g，葡萄糖10.0g，瓊脂粉15g，濃度1％的孟加拉紅溶液3.3ml。