[發(fā)明專利]含人間充質干細胞外泌體提取物的矽肺病治療霧化劑及其制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710347031.8 | 申請日： | 2017-05-17 |
| 公開（公告）號： | CN107137426A | 公開（公告）日： | 2017-09-08 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張冰晶;魯振宇;韓洪起;秦臻;熊亮;高婧彧;徐悅;黃文敬;聞婧 | 申請（專利權）人： | 天津普瑞賽爾生物科技有限公司 |
| 主分類號： | A61K35/28 | 分類號： | A61K35/28;A61K9/12;A61P11/00;A61P31/04;C12N5/0775 |
| 代理公司： | 天津才智專利商標代理有限公司12108 | 代理人： | 王曉紅 |
| 地址： | 300392 天津市濱海新區(qū)華苑產*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 人間 干細胞 外泌體 提取物 矽肺 治療 霧化 及其 制備 方法 | ||
1.一種含人間充質干細胞外泌體提取物的矽肺病治療霧化劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)人間充質干細胞培養(yǎng)：從細胞庫中選取P2-P6的人間充質干細胞復蘇，接種批次記為第一批次、第二批次、第三批次，接種密度分別為最大融合度的50％-60％、35％-45％、20％-30％；培養(yǎng)細胞所用完全培養(yǎng)基為無酚紅DMEM/DF12和體積比濃度為10％胎牛血清；細胞接種完成，放于二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)，溫度37℃，二氧化碳體積比濃度5％；
(2)第一批次細胞融合度達到70％-80％時，以生理鹽水清洗細胞2次，用復方電解質注射液進行饑餓培養(yǎng)；
(3)饑餓培養(yǎng)12-24小時后，第一批次細胞融合度達90％-95％，收取細胞培養(yǎng)上清，3000-4500g條件下離心5-8min除去沉淀，取離心后上清備用；
(4)取培養(yǎng)的第二批次細胞，當細胞融合度達到70％-80％，以生理鹽水清洗第二批次細胞2次，用步驟(3)中細胞培養(yǎng)上清進行饑餓培養(yǎng)；
(5)饑餓培養(yǎng)12-24小時后，第二批次細胞融合度達90％-95％，收取細胞培養(yǎng)上清，3000-4500g條件下離心5-8min除去沉淀，取離心后上清備用；
(6)取培養(yǎng)的第三批次細胞，當細胞融合度達到70％-80％，以生理鹽水清洗第三批次細胞2次，用步驟(5)中細胞培養(yǎng)上清進行饑餓培養(yǎng)；
(7)饑餓培養(yǎng)12-24小時后，第三批次細胞融合度達90％-95％，收取細胞培養(yǎng)上清，3000-4500g條件下離心5-8min除去沉淀，取離心后上清備用；
(8)連續(xù)饑餓三次后將收集的步驟(7)上清以0.22um濾膜過濾，提取其中的干細胞外泌體，以20-40ml的生理鹽水重懸分離獲得的外泌體制備成霧化劑，放于4℃冰箱中保存。
2.根據權利要求1所述含人間充質干細胞外泌體提取物的矽肺病治療霧化劑的制備方法，其特征在于，所述人間充質干細胞為人臍帶間充質干細胞、脂肪間充質干細胞、骨髓間充質干細胞、胎盤間充質干細胞、月經血間充質干細胞或牙髓間充質干細胞。
3.如根據權利要求1所述的制備方法制得的含人間充質干細胞外泌體提取物的矽肺病治療霧化劑。
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