[發明專利]一種從臍帶組織中提取復合細胞因子的方法

有效

• 申請號: 201710346450.X
• 申請日: 2017-05-17
• 公開（公告）號: CN107236032B
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 高文勇;羅美華
• 申請（專利權）人: 廣州雅安生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/475
• 分類號: C07K14/475;C07K14/50;C07K14/52;C07K14/535;C07K14/54;C07K14/81;C07K1/34;C12N5/00;A61K8/64;A61Q19/00;A61Q19/02;A61Q19/08
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 李渤

本發明提供一種從臍帶組織中提取復合細胞因子的方法，所述方法包括以下步驟：1)臍帶組織的處理、2)復合細胞因子的富集、3)復合蛋白因子的分離、4)將步驟3)得到的上清液加壓過濾，并進一步使用3KD濃縮脫鹽，既得。本發明還提供了一種從臍帶組織中提取的復合細胞因子。本發明直接從臍帶組織中獲得復合細胞因子，這些復合細胞因子均為人體成分，可以直接被皮膚吸收，避免過敏反應，無副作用。本發明的方法不涉及高溫及化學滅菌的方式，僅僅利用過濾法去除微生物污染，既避免了產品出現污染變質問題，又保證生物活性成分不被高溫、輻射或化學殺菌劑改變結果，保證了產品中細胞因子的活性，使產品效果穩定。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種從臍帶組織中提取復合細胞因子的方法，本發明還涉及本發明提取的復合細胞因子的保存方法及其用途。

背景技術

細胞因子是一類通過與特異的、高親和的細胞膜受體結合，調節細胞生長并參與細胞功能等多效應的多肽類物質，對不同種類細胞具有一定的專一性，由多種維生素、氨基酸、多醣類成分、復雜蛋白質體、醣蛋白等組成。細胞因子由正常細胞分泌，分泌方式主要包括自分泌(autocrine)和旁分泌(paracrine)，具有多效性、重疊性、協同性、拮抗性和雙重性等特點，該特點是其具有非常重要實驗研究價值，有助于闡明分子水平的免疫調節機理，有助于疾病的預防、診斷和治療，特別是利用基因工程技術生產的重組細胞因子已用于治療腫瘤、感染、炎癥、造血功能障礙等。目前實驗研究結果表明其可應用于細胞培養和3D打印的生物材料，具有抗衰老和免疫調節等作用，未來具有非常廣闊的應用前景。

間充質干細胞(Mesenchymal stem cells)是一類具有多向分化潛能的成體干細胞，源于發育早期的中胚層，主要存在于結締組織和器官間質中，可以從骨髓、外周血、脂肪及皮膚等多種組織中獲得。間充質干細胞屬于非終末分化細胞，它既有間質細胞的特征，又有內皮細胞及上皮細胞的特征；作為一類多能干細胞，它在體外特定的誘導條件下，可以向骨、軟骨、肌肉、肌腱、肝、脂肪、神經、內皮及胰島樣細胞等方向增殖分化。目前已知對心肌梗死、糖尿病、骨質疏松、骨壞死、狼瘡性腎炎、肝硬化、肝衰竭、多發性肝硬化癥、系統性紅斑狼瘡、帕金森病、脊髓損傷等都有一定治療效果。

近來有學者從分娩后的廢棄物-臍帶中分離培養出間充質干細胞，并進行了形態學、分化功能和表面標志物等生物學表型鑒定，確定了這種新型間充質干細胞的開發潛質。這種新型間充質干細胞與骨髓間充質干細胞相比具有明顯的優勢：(1)來源充足，取材方便，無倫理學爭議；(2)含量豐富，可在體外進行分離、培養，且生物學性狀穩定，多次傳代擴增仍能保持旺盛功能；(3)免疫原性極低；(4)分泌能力強，在增殖生長過程中會產生大量細胞因子等。

目前，從臍帶中獲得的間充質干細胞除應用于臨床研究與治療外，干細胞分泌產生的各種多肽類細胞因子也越來越被關注。在干細胞的培養液中含有多種干細胞分泌的細胞因子，如干細胞因子(SCF)、肝細胞生長因子(HGF)、神經生長因子(NGF)、基質細胞源性生長因子(SDF)、血管內皮細胞生長因子(VEGF)、血小板源性生長因子(PDGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、胰島素樣生長因(IGF)、表皮生長因子(EGF)、白細胞介素(IL)、巨核細胞集落刺激因子(M-CSF)、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素(IFN)等，通過多種因子的協同作用可有效調控機體細胞信號傳導、活化人體干細胞，進而生理性修復或替代機體損傷、病變及衰老的細胞等。

美國科學家LEVI博士就發現干細胞分泌的細胞因子具有除皺作用，將多種細胞因子組成的生物活性復合蛋白作用于皮膚真皮層的成纖維干細胞，使處于休眠、損傷的成纖維干細胞被激活和修復，并分化成大量成熟的成纖維細胞用于皮膚更新。