[發明專利]篩選與少根浮萍根生長相關的分子標記的方法

有效

• 申請號: 201710344853.0
• 申請日: 2017-05-16
• 公開（公告）號: CN107201399B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 徐娜娜;徐嘉俊;朱旭輝
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895
• 代理公司: 北京國翰知識產權代理事務所(普通合伙) 11696
• 代理人: 吳勝平

1.篩選與少根紫萍根生長相關的分子標記的方法，包括克隆體培養、基因組DNA提取、設計微衛星引物、PCR擴增和數據統計與分析；所述的微衛星引物為：Sp16：F:GGATCTGTATATGCCCTCTCT；R:GCCGCTATCTCAGGTCTTGCT；Sp51：F:CTCGCACATCAGTTCACAGGA；R:TCAGACATCTGGCGCAGTAGA；Sp53：F:AGGACGACGACCTCTACTGCC；R:TACGAGTTCTGCGGACCATCA。

2.根據權利要求1所述的篩選與少根紫萍根生長相關的分子標記的方法，其特征在于：所述的植株克隆體培養的營養液成份及其濃度為：氮0.3~0.4g/L、磷酐0.1~0.15g/L、氧化鉀0.16~0.23g/L、氧化鎂0.01~0.015g/L和硫0.012~0.02g/L。

3.根據權利要求1所述的篩選與少根紫萍根生長相關的分子標記的方法，其特征在于：所述的植株克隆體在光照培養箱中進行室內培養50~70d，培養條件為22.5~23.5℃，濕度73~83%，光照強度為1800~2200lux，光暗時間14~16:10~8h。

4. 根據權利要求1所述的篩選與少根紫萍根生長相關的分子標記的方法，其特征在于：所述的PCR擴增體系為18~22μl，其中包括3.4~4.2U TaqDNA聚合酶、1.6~2.2μl 10×PCRbuffer、0.7~0.9mM dNTP、上游、下游引物各0.3mM、50~100ng DNA模板，ddH₂O補至終體積20μl；在PCR擴增儀上進行擴增，擴增程序為92~96℃預變性4.5~5.6min；93~96℃變性28~33s，52~56℃復性33~37s，70~75℃延伸36~43s，共33~38個循環；最終70~75℃延伸2.5~3.4min。

5. 根據權利要求1所述的篩選與少根紫萍根生長相關的分子標記的方法，其特征在于：所述的數據統計與分析為對紫萍克隆的根數/片、總根長/片和平均根長/片進行統計描述，應用單因素方差分析和最小顯著差數法或Dunnett T3非參數多重比較兩兩基因型生長性狀特征之間的差異性；應用一般線性模型過程對根數/片、總根長/片和平均根長/片性狀與微衛星位點的關聯性進行最小二乘分析,并對同一位點的各基因型進行多重比較。