[發(fā)明專利]糖基轉(zhuǎn)移酶、突變體及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710344730.7
• 申請(qǐng)日: 2017-05-16
• 公開（公告）號(hào): CN108866020A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周志華;嚴(yán)興;王平平;魏維;李曉東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;C12N15/54;C12N15/63;C12P33/20;C12N15/82
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;陸鳳

1.一種分離的多肽，其特征在于，所述分離的多肽的氨基酸序列在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的第222位的氨基酸殘基為非Gln和/或在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:19所示氨基酸序列第322位的氨基酸殘基為非Ala。

2.一種分離的多肽，其特征在于，所述的多肽選自下組：

(a)具有SEQ ID NO.:4或SEQ ID NO.:21所示氨基酸序列的多肽；

(b)將SEQ ID NO.:4或SEQ ID NO.:21所示氨基酸序列的多肽經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選1-20個(gè)、更優(yōu)選1-15個(gè)、更優(yōu)選1-10個(gè)、更優(yōu)選1-3個(gè)、最優(yōu)選1個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信號(hào)肽序列后形成的、并具有糖基轉(zhuǎn)移酶活性的衍生多肽；

(c)序列中含有(a)或(b)中所述多肽序列的衍生多肽；

(d)氨基酸序列與SEQ ID NO.:4或SEQ ID NO.:21所示氨基酸序列的同源性≥85％(較佳地≥90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)，并具有糖基轉(zhuǎn)移酶活性的衍生多肽。

3.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸為選自下組的序列：

(A)編碼權(quán)利要求1或2所述多肽的核苷酸序列；

(B)編碼如SEQ ID NO.:4或SEQ ID NO.:21所示多肽或其衍生多肽的核苷酸序列；

(C)如SEQ ID NO.:3或SEQ ID NO.:22所示的核苷酸序列；

(D)與SEQ ID NO.:3或SEQ ID NO.:22所示序列的同源性≥90％(較佳地≥91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)的核苷酸序列；

(E)在SEQ ID NO.:3或SEQ ID NO.:22所示核苷酸序列的5’端和/或3’端截短或添加1-60個(gè)(較佳地1-30，更佳地1-10個(gè))核苷酸所形成的核苷酸序列；

(F)與(A)-(E)任一所述的核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列。

4.一種載體，其特征在于，所述的載體含有權(quán)利要求3所述的多核苷酸。

5.權(quán)利要求1或2所述分離的多肽的用途，其特征在于，它被用于催化以下反應(yīng)，或被用于制備催化以下反應(yīng)的催化制劑：

(i)將來(lái)自糖基供體的糖基轉(zhuǎn)移到四環(huán)三萜類化合物的C-3位羥基上。

6.如權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述分離的多肽用于催化下述反應(yīng)或被用于制備催化下述反應(yīng)的催化制劑：

其中，R1為H或者OH；R2為H或者OH；R3為H或者糖基；R4為糖基。

7.一種體外糖基化方法，其特征在于，包括步驟：

在糖基轉(zhuǎn)移酶存在下，將糖基供體的糖基轉(zhuǎn)移到四環(huán)三萜類化合物的C-3位羥基上；從而形成糖基化的四環(huán)三萜類化合物；

其中，所述的糖基轉(zhuǎn)移酶為權(quán)利要求1或2所述的多肽或其衍生多肽。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述的衍生多肽選自：

將SEQ ID NO.:4或SEQ ID NO.:21所示氨基酸序列的多肽經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信號(hào)肽序列后形成的、并具有糖基轉(zhuǎn)移酶活性的衍生多肽；或

氨基酸序列與SEQ ID NO.:4或SEQ ID NO.:21氨基酸序列的同源性≥85％(較佳地≥90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％)，并具有糖基轉(zhuǎn)移酶活性的衍生多肽；

其中，所述糖基轉(zhuǎn)移酶活性指能將糖基供體的糖基轉(zhuǎn)移到四環(huán)三萜類化合物的C-3位羥基上的活性。

9.一種進(jìn)行糖基催化反應(yīng)的方法，其特征在于，包括步驟：在權(quán)利要求1或2所述的多肽或其衍生多肽存在的條件下，進(jìn)行糖基催化反應(yīng)。