[發明專利]一種惡臭假單胞菌及在制備(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇中的應用

有效

• 申請號: 201710344320.2
• 申請日: 2017-05-16
• 公開（公告）號: CN107118986B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 何軍邀;王普;白東亞
• 申請（專利權）人: 浙江醫藥高等專科學校;浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P7/22;C12R1/40
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

本發明公開了一種惡臭假單胞菌及在制備(R)?1?(2?三氟甲基苯基)乙醇中的應用，采用該新菌種催化制備光學純(R)?1?(2?三氟甲基苯基)乙醇具有底物濃度高，立體選擇性好，產物光學純度高等優點。本發明通過采用惡臭假單胞菌(Pseudomonas sp.)ZJPH1606細胞為催化劑的手性生物催化，當底物濃度為10mmol/L時，目的產物(R)?1?(2?三氟甲基苯基)乙醇的ee達到99％，產率達到64％。

(一)技術領域

本發明涉及一株可用于生物催化不對稱還原2-三氟甲基苯乙酮制備高光學純度(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的新菌種——惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)ZJPH1606及其應用。

(二)背景技術

(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的化學結構式為：

(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇是用于合成新型抗腫瘤藥物PLK1激酶拮抗劑GSK461364(化學名：5-[6-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-1H-苯并咪唑-1-基]-3-[(1R)-1-[2-(三氟甲基)苯基]乙氧基]-2-噻吩甲酰胺)的重要手性中間體，該化合物競爭ATP與受體接合，從而抑制腫瘤細胞惡性分裂，臨床應用上具有較好的療效。

采用化學法制備(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇，需要使用價格昂貴的如銠、釕等金屬催化劑，會對環境造成污染。采用微生物全細胞催化的生物不對稱還原方法制備(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇具有反應條件溫和、立體選擇性高、環境友好等優點。

已有文獻報道，Du等(Organometallics,2014,33:974-982)利用手性Ru金屬配體催化劑催化還原2-三氟甲基苯乙酮制備(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇，最大轉化數TON、轉化頻率TOF和產率分別是495、1450和99％；許建和等(專利CN201210423006.0)利用基因挖掘技術，對來自耐熱克魯維酵母(Kluyveromyces thermotolerans)的羰基還原酶基因構建重組工程菌E.coli BL21(DE3)/pET-KtCR，在催化還原2-三氟甲基苯乙酮制備(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇中，ee99％，產率只有2％。

(三)發明內容

本發明目的是提供一株可用于生物催化不對稱還原2-三氟甲基苯乙酮制備高光學純度(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的微生物新菌種——惡臭假單胞菌(Pseudomonasputida)ZJPH1606，以及該菌種在催化不對稱合成制備(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇中的應用。

本發明采用的技術方案是：

本發明提供一株新菌株--惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)ZJPH1606，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏日期：2017年3月9日，保藏編號：CCTCC NO：M 2017110，地址：中國，武漢，武漢大學，郵編：430072。

本發明還提供一種所述惡臭假單胞菌ZJPH1606在催化2-三氟甲基苯乙酮制備(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇中的應用，反應式如下：

進一步，所述的應用為：以2-三氟甲基苯乙酮為底物，以惡臭假單胞菌ZJPH1606經發酵獲得的濕菌體為酶源，以pH為6.0～9.0的緩沖液(優選磷酸鹽緩沖液)為反應介質構成轉化體系，在25℃～35℃、200r/min下轉化反應，反應結束后，獲得含(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的反應液，將反應液經分離純化，得到(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇。所述底物2-三氟甲基苯乙酮的初始濃度為5～100mmol/L緩沖液(優選5-25mmol/L)，惡臭假單胞菌ZJPH1606濕菌體的添加量以緩沖液體積計為50～300g/L緩沖液(優選100-300g/L)。