[發(fā)明專利]一種Cas9核酸酶R919P及其用途有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710343933.4 | 申請(qǐng)日： | 2017-05-16 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN106939303B | 公開（公告）日： | 2021-02-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 吳強(qiáng);李金環(huán);壽佳 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 上海交通大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N9/22 | 分類號(hào)： | C12N9/22;C12N15/55;C12N15/63 |
| 代理公司： | 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 李艷;許亦琳 |
| 地址： | 200240 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 cas9 核酸酶 r919p 及其 用途 | ||
1.一種Cas9核酸酶用于制備CRISPR/Cas9系統(tǒng)的用途，所述Cas9核酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述CRISPR/Cas9系統(tǒng)具有針對(duì)DNA雙鏈進(jìn)行切割產(chǎn)生突出斷裂末端，通過細(xì)胞自身修復(fù)系統(tǒng)，以補(bǔ)平連接的方式加入與突出斷裂末端互補(bǔ)的堿基功能，所述CRISPR/Cas9系統(tǒng)可用于基因組DNA片段編輯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述Cas9核酸酶與野生型Cas9核酸酶相比，對(duì)目的基因組DNA片段進(jìn)行切割時(shí)產(chǎn)生的突出斷裂末端與鈍斷裂末端的比例不同。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述野生型Cas9核酸酶為SpCas9。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述野生型Cas9核酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述編輯包括單位點(diǎn)編輯或多位點(diǎn)編輯，所述多位點(diǎn)編輯的編輯位點(diǎn)數(shù)為兩個(gè)及以上。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述多位點(diǎn)編輯的方式包括不同長(zhǎng)度DNA片段刪除、反轉(zhuǎn)、重復(fù)、易位或插入。
7.一種基因組DNA片段單位點(diǎn)編輯方法，利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)，采用如權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)所述的Cas9核酸酶對(duì)DNA雙鏈進(jìn)行切割產(chǎn)生突出斷裂末端，通過細(xì)胞自身修復(fù)系統(tǒng)，以補(bǔ)平連接的方式加入與突出斷裂末端互補(bǔ)的堿基，實(shí)現(xiàn)特定堿基的插入。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的基因組DNA片段單位點(diǎn)編輯方法，其特征在于，所述方法可以改變單位點(diǎn)編輯時(shí)堿基突變的特征。
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