[發(fā)明專利]一種基于響應面法提取普洱熟茶黃酮類化合物的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710343671.1
• 申請日: 2017-05-16
• 公開（公告）號: CN107132290A
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李家華;王春雪;趙平;倪婷婷;關(guān)文玉;史寅華;趙明
• 申請（專利權(quán)）人: 云南農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于響應面法提取普洱熟茶黃酮類化合物的方法，屬食品化學的分析技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

黃酮類化合物是具2-苯基色原酮基本結(jié)構(gòu)多酚類化合物，其對植物的生長以及人體抗病防菌等方面起著重要作用。現(xiàn)代臨床醫(yī)學研究表明，黃酮類化合物具有保護神經(jīng)系統(tǒng)、協(xié)調(diào)內(nèi)分泌、提高免疫力、防治心腦血管系統(tǒng)疾病、消化、呼吸系統(tǒng)維護等生物活性。茶葉由于其含有豐富的生理活性物質(zhì)和保健功效成分，目前已成為世界上消費量和飲用人數(shù)最多的第一大飲料。黃酮類化合物是茶葉中主要的生理活性成分，同時對茶葉品質(zhì)也有重要影響，其含量約占茶葉干重的3％-4％。YnbrHoba，M.C.和Uhkbhiiibhjih，Hii等從茶樹品種中已分離鑒定了22種黃酮類物質(zhì)。目前為止，人們將綠茶作為主要茶類研究對象，已經(jīng)從中發(fā)現(xiàn)19種黃酮類化合物。1983年，程啟坤等人在比較研究了茶、油茶和紅山茶的黃酮醇含量后。測定茶葉中黃酮醇總量為12.24mg/g。

普洱茶是云南的特色茶，是國家地理標志性產(chǎn)品，在其加工過程中按后發(fā)酵工序的有、無分為普洱熟茶和普洱生茶兩大類。兩者不僅在品質(zhì)特征上有明顯差異，在內(nèi)含物的化學成分上也相差懸殊。普洱熟茶在后發(fā)酵階段在微生物、熱和多種復雜酶類的作用下，屬于天然酚類化合物的黃酮類物質(zhì)因其分子中含有較多的酚性羥基，性質(zhì)活潑，不穩(wěn)定，容易發(fā)生氧化，水解、異構(gòu)、裂解等化學變化，形成聚合度更高的復雜多聚體，給普洱熟茶中黃酮類物質(zhì)含量的測定帶來了一定難度，不同研究者對普洱熟茶中游離態(tài)黃酮苷元含量的測定結(jié)果皆不一致。如：Chi-Hua L等所測定的結(jié)果表明：無論是新加工的普洱生茶、陳年普洱生茶還是普洱熟茶中都沒檢測到山奈酚，而楊梅素和槲皮素也極少，僅為0.06mg/g；與之相反，盧邦俊等的研究結(jié)果是：楊梅素和槲皮素處在2.83-3.19mg/g之間；李家華等的研究結(jié)果是：普洱熟茶中楊梅素、槲皮素和山奈酚的含量分別為0.33mg/g、1.31mg/g和0.48mg/g，總黃酮含量為5.32mg/g。

近年來，也有很多茶學研究者對茶葉黃酮類化合物提取方法開展了部分研究，其中在優(yōu)化實驗條件中多采用單因素、正交試驗和響應面法。如：徐麗璇曾采用正交試驗設(shè)計比較三種方法提取普洱茶中總黃酮的效率；王巖等響應面優(yōu)化綠茶中黃酮類化合物的提取條件研究；孫業(yè)良，姜明杉陳暄等也對基于響應面分析法對綠茶中黃酮提取工藝進行了優(yōu)化。但至今為止，國內(nèi)仍沒有應用響應面法研究普洱熟茶黃酮類化合物提取工藝的研究報道。鑒于響應面法能夠連續(xù)針對實驗各水平進行綜合分析，解決了正交設(shè)計中只能對孤立點分析的缺陷，如在普洱熟茶黃酮類化合物的研究中引入響應面法，并通過驗證試驗確定最佳工藝參數(shù)，必將會對普洱茶中黃酮類化合物的深入研究提供實驗基礎(chǔ)。

本領(lǐng)域技術(shù)人員皆知，黃酮類物質(zhì)是影響茶葉感官品質(zhì)的主要成分，對茶葉的澀味、增強咖啡堿苦味及與茶湯色澤的相關(guān)性較明顯。因此，對以湯色烏潤褐紅、滋味醇厚回甘，并具有獨特陳香為特征的普洱茶來說，科學、精確的黃酮類物質(zhì)分析方法的確立，對發(fā)酵過程中黃酮類物質(zhì)變化情況的監(jiān)測，合理控制普洱茶發(fā)酵時間、堆溫、發(fā)酵車間的濕度，盡量保持成品茶中黃酮類物質(zhì)的適度含量，提高普洱茶品質(zhì)和促進云南普洱茶健康發(fā)展具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之不足，提供一種基于響應面法提取普洱熟茶黃酮類化合物的方法，其解決了至今為止普洱茶中黃酮類化合物的分析中經(jīng)常使用的正交試驗在優(yōu)化條件方面不能連續(xù)對各水平實驗條件進行綜合分析，導致孤立不全面的缺陷。為全面考查普洱茶黃酮類化合物的提取影響因素，提供了更好地反映提取效果的優(yōu)化工藝。

一種基于響應面法提取普洱熟茶黃酮類化合物的方法，其特征在于：包括以下方法步驟：

1、普洱熟茶中黃酮類化合物的提取制備；

2、單因素對普洱熟茶中黃酮類化合物提取的影響；

3、普洱熟茶中黃酮類化合物提取最陡爬坡試驗；

4、響應面法優(yōu)化普洱熟茶中黃酮類化合物提取的結(jié)果；

5、響應面優(yōu)化普洱熟茶中黃酮類化合物提取的分析；

6、響應面優(yōu)化普洱熟茶黃酮類化合物提取條件驗證試驗。

一種基于響應面法提取普洱熟茶黃酮類化合物的方法，其特征在于：最佳工藝參數(shù)是：乙醇濃度75％(v:v)、浸提時間135min、浸提溫度65℃、料液比1:10(g:mL)，按該條件提取的普洱熟茶中黃酮醇含量達到2.36mg/g，總黃酮含量達到5.93mg/g。