[發明專利]抗血清I型MDV gI蛋白的單克隆抗體、分泌該抗體的雜交瘤細胞株及其應用

有效

• 申請號: 201710343627.0
• 申請日: 2017-05-16
• 公開（公告）號: CN107090438B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 崔紅玉;劉長軍;張艷萍;王云峰;王笑梅
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/08;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種抗血清I型MDV gI蛋白的單克隆抗體、分泌該抗體的雜交瘤細胞株及其應用。本發明對分泌抗血清I型MDV gI蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株進行3輪亞克隆篩選，獲得了一株命名為A2E10B8的雜交瘤細胞株，該細胞產生的單克隆抗體僅能與血清I型MDV gI蛋白發生特異性結合反應，而與其它MDV血清型(血清2型、3型)不發生反應。繼而經體外間接免疫熒光試驗表明，A2E10B8單克隆抗體僅能與血清I型MDV病毒蝕斑結合，產生特異性綠色熒光，而與其它血清型MDV病毒蝕斑不能結合，不產生綠色熒光，證明該A2E10B8單克隆抗體是MDV血清I型特異性單克隆抗體。本發明的提出為血清I型MDV的基因工程診斷試劑的研制和MDV二價或多價疫苗檢驗提供了有力工具。

技術領域

本發明涉及一種單克隆抗體、分泌該抗體的雜交瘤細胞株及其應用，尤其涉及一種抗血清I型MDV gI蛋白的單克隆抗體、分泌該抗體的雜交瘤細胞株及其在檢測MDV-1相關領域中的應用，本發明屬于分子免疫學技術領域。

背景技術

雞馬立克氏病(Mareks disease，MD)是由雞馬立克氏病病毒(Mareks diseasevirus，MDV)引起的一種禽淋巴組織增生性疾病，具有高度傳染性，主要引起內臟器官、外周神經及皮膚的T細胞淋巴瘤。近年來MDV毒力不斷增強，給禽養殖業帶來了更大的挑戰。

根據血清學相關性，MDV分為3個血清型：血清1型(MDV-1)，即禽皰疹病毒2型(GaHV-2)，具有致瘤性，能夠引起MD的致瘤型毒株；血清2型(MDV-2)，即禽皰疹病毒3型(GaHV-3)，非致瘤型毒株；血清3型(MDV-3)，即火雞皰疹病毒(MeHV-1)，是用于MD疫苗的非致瘤型毒株(Biggs,2001)。其中，GaHV-2又被劃分為4種致病型，分別為溫和型(m，如CU-2株)，強毒力型(v，如GA和JM/102W株)，超強毒力型(vv，如Md5和RB-1B株)和超超強毒力型(vv+，如584a和648a株)(Witter,1997；Witter et al.,2005)。三種血清型的毒株之間具有血清學交叉反應。

1997年，Calnek和Witter闡述了MD的致病機理，詳細闡述了MD致病過程的主要階段。一般認為，MD主要通過呼吸系統感染機體，引起脾臟、法氏囊、胸腺及其他組織器官的B細胞溶解性感染；隨后發生炎癥反應，招募大量的炎癥細胞，包括巨噬細胞、嗜中性粒細胞、淋巴細胞；T淋巴細胞被激活，發生潛伏感染(Calnek,2001)。感染的早期，形成全身細胞結合性病毒血癥。隨后病毒轉移至羽毛囊上皮細胞向外界排放病毒粒子，這是機體向外界環境排放病毒的唯一部位(Calnek et al.,1970)。脫落的羽毛囊細胞呈角質化，不僅可以保護細胞內病毒，而且能夠維持病毒感染力達一年之久(Hlozanek et al.,1973；Schat etal.,1985)。在潛伏期，淋巴細胞內病毒DNA的拷貝數較低(不足5個拷貝)。溶細胞階段，初級淋巴器官受到損害并導致免疫抑制。在受感染家禽體內，潛伏感染的CD4+T細胞轉化形成腫瘤細胞(Schat et al.,1991)，內含大量的病毒DNA(至少10～20個拷貝)并有大量的病毒基因得以表達，最終導致宿主死亡。

MDV-1重要功能基因主要包括：直接致瘤基因：meq和vTR；間接致瘤基因：vIL-8、vLIP、RLORF4和pp38；立即早期基因：ICP4和ICP22；囊膜糖蛋白：gB、gC、gD、gE、gH、gI、gK和gM等；復制相關基因：ΜL5、ΜL8、ΜL9、ΜL29、ΜL30、ΜL42、ΜL52等。gI是MDV的主要囊膜糖蛋白之一，可與gE蛋白形成異二聚體復合物(BALAN,1994)，促進糖蛋白的成熟并協助糖蛋白在胞漿的轉運及正確分布，是病毒復制的必需蛋白(Ye et al.,1999)。通過免疫共沉淀試驗表明gI和gE之間可相互作用形成gE/gI復合物(Tan et al.,2001)。用BAC克隆構建的gM、gI和gE基因缺失突變株，不能傳播病毒感染((Schumacher et al.,2001)，表明這些基因編碼的糖蛋白是病毒復制必需蛋白。