[發(fā)明專利]大豆蛋白及其編碼基因的應(yīng)用及引物、表達(dá)載體和制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710343021.7
• 申請(qǐng)日: 2017-05-16
• 公開（公告）號(hào): CN107119004B
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉昀;吳佳輝;鄭易之;程華;孫楠;譚芳美
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/29;C12N15/70;C12N15/11;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/54;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市恒申知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44312
• 代理人: 王利彬

本發(fā)明公開一種大豆蛋白及其編碼基因的應(yīng)用及引物、表達(dá)載體和制備方法，將所述大豆蛋白或其編碼基因用于提高植物或大腸桿菌的耐鹽性。其中，所述大豆蛋白的基因編碼為Glyma11g07260.1。該大豆蛋白可增強(qiáng)大腸桿菌的耐鹽性，由于很多抗逆基因在大腸桿菌和植物體系具有相似的抗逆功能，因此，該大豆蛋白及其編碼基因在植物抗逆領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及一種大豆蛋白及其編碼基因的應(yīng)用及引物、表達(dá)載體和制備方法。

背景技術(shù)

鹽堿、干旱等非生物脅迫是限制植物生長發(fā)育的主要環(huán)境因子。這些環(huán)境因子導(dǎo)致植物體內(nèi)發(fā)生一系列的生理代謝反應(yīng)，表現(xiàn)為代謝和生長的可逆性抑制，嚴(yán)重時(shí)甚至引起不可逆?zhèn)Γ瑢?dǎo)致整個(gè)植株死亡。因此，如何提高植物的抗逆功能，一直是人們研究的課題。

因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于改進(jìn)和發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種大豆蛋白及其編碼基因的應(yīng)用及引物、表達(dá)載體和制備方法，該大豆蛋白的基因編碼為Glyma11g07260.1，本發(fā)明中旨在提供一種該大豆蛋白在提高植物耐鹽性中應(yīng)用。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種大豆蛋白的應(yīng)用，其中，所述大豆蛋白的基因編碼為Glyma11g07260.1，將所述大豆蛋白用于提高植物或大腸桿菌的耐鹽性。

一種大豆蛋白的編碼基因的應(yīng)用，其中，所述大豆蛋白的基因編碼為Glyma11g07260.1，將所述大豆蛋白的編碼基因用于提高植物或大腸桿菌的耐鹽性。

一種用于制備大豆蛋白或其編碼基因的引物，其中，所述大豆蛋白的基因編碼為Glyma11g07260.1，引物的序列如下所示：

F：3’-ATGTTTCACTCAATCAAAACGG(Nde I)-5’；

R：3’-TTAATTGGCGCTGGTCTGGTG(Xho I)-5’。

一種用于提高耐鹽性的表達(dá)載體，其中，所述表達(dá)載體為攜帶有SEQ IDNO.4所示的大豆蛋白基因，用于表達(dá)基因編碼為Glyma11g07260.1的大豆蛋白。

所述的用于提高耐鹽性的表達(dá)載體，其中，所述表達(dá)載體用PET-28a蛋白表達(dá)載體重組得到，該大豆蛋白基因通過酶切位點(diǎn)Nde I和Xho I連接在表達(dá)載體上。

一種用于提高耐鹽性的表達(dá)載體的制備方法，其中，所述大豆蛋白的基因編碼為Glyma11g07260.1，其制備方法包括以下步驟：

擴(kuò)增目的基因：以F：3’-ATGTTTCACTCAATCAAAAC GG-5’；R：3’-TTAATTGGCGCTGGTCTGGTG-5’作為引物，以大豆R0期胚根cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到目的基因片段，目的基因片段的基因序列如SEQ ID NO.4所示；

構(gòu)建重組質(zhì)粒：將目的基因片段與經(jīng)Nde I和Xho I雙酶切的蛋白表達(dá)載體PET-28a，通過T4連接酶連接酶切產(chǎn)物，構(gòu)建pET-28a重組質(zhì)粒。

所述的用于提高耐鹽性的表達(dá)載體的制備方法，其中，構(gòu)建重組質(zhì)粒過程中，包括以下步驟：

將目的基因片段和經(jīng)過雙酶切的PET-28a蛋白表達(dá)載體按照摩爾比10:1混合，加入0.5μL T4連接酶，1μL 10×Buffer，用水補(bǔ)齊至10μL，16℃連接過夜。

有益效果：本發(fā)明中首次發(fā)現(xiàn)該蛋白可以提高大腸桿菌的耐鹽性，對(duì)于其在植物抗逆工程上的應(yīng)用具有指導(dǎo)意義。該大豆蛋白可增強(qiáng)大腸桿菌的耐鹽性，由于很多抗逆基因在大腸桿菌和植物體系具有相似的抗逆功能，因此，該基因在植物抗逆領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用前景。

附圖說明