[發明專利]犬流感病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株F112及應用

有效

• 申請號: 201710339546.3
• 申請日: 2017-05-15
• 公開（公告）號: CN107034197B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 夏興霞;王永山;王曉麗;安欣;歐陽偉;諸玉梅;潘群興;王晶宇;樓晶瑤;姚凌云;吳世妍;畢振威;芮榮;劉永杰
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;G01N33/569;A61K39/42;A61P31/16
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

本發明涉及一種犬流感病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株F112，屬于生物技術領域。本發明是運用淋巴細胞雜交瘤技術，用犬流感病毒流行毒株A/Canine/Nanjing/11/2012(H3N2)制備免疫抗原，從中篩選出一株強效雜交瘤細胞株F112，對犬流感病毒的血凝抑制效價為2¹²、中和效價為10⁵。用F112單克隆抗體制備的犬流感預防治療劑，用于預防治療犬流感，有效率達到100％。強效F112單克隆抗體既可以用于犬流感的檢測診斷又可以用于預防治療，具有良好的生產應用前景。

技術領域

本發明涉及一種犬流感病毒單克隆抗體雜交瘤細胞，屬于生物技術領域。

背景技術

犬流感(Canine influenza，CI)是由正粘病毒科流感病毒屬A型流感病毒引 起的犬呼吸道傳染病。A型流感病毒感染譜較廣，可感染人類和豬、馬、禽類等 多種動物。犬流感病毒(Canine influenza virus，CIV)主要通過空氣傳播，但經 消化道或通過接觸病毒污染的各種物品也是重要的傳播途徑。過去一般認為犬不 是A型流感病毒的易感動物，但近十多年來已陸續發現犬可被不同亞型的流感病 毒所感染。患犬常出現噴嚏、咳嗽、發熱和流涕等臨床癥狀，死亡率為1％～5％。 2004年有報道稱在美國佛羅里達發現了犬被馬源流感病毒H3N8亞型感染；2006 年華南農大首次從犬身上分離到H3N2亞型犬流感病毒；2007年韓國流行的H3N2 亞型犬流感病毒，被證明是禽源性的。另外，也有研究證明在犬貓體內分離到流 感病毒。2012年，在山東省的某個發病犬病料中分離到犬流感病毒，最終被鑒定 為1株重配的H5N2亞型流感病毒。目前，H3N2亞型犬流感病毒是中國犬群中流 行的主要亞型。犬流感病毒不僅可對犬的健康和養殖造成嚴重危害，也對公共衛 生安全造成潛在的嚴重威脅。

犬流感病毒在宿主體內可潛伏2～5d，大部分病犬表現出咳嗽、噴嚏、流涕 等主要癥狀，部分嚴重犬會出現體溫升高，呼吸數增加的現象，且咳嗽能持續20 d左右。對處于早期病程的犬用廣譜抗病毒藥物可獲得一定的治療效果。病情較 輕時，出現柔和性的濕咳，部分病例出現干咳，同時流清鼻涕，當病情加重時， 鼻腔會出現黏稠的黃色膿性鼻涕，此時可能繼發細菌感染。發病犬多數能在1～2 周逐漸康復，個別嚴重癥狀的病例會出現死亡，對死亡犬進行病理檢查可觀察到 氣管炎、支氣管炎等病理現象。少部分犬會出現隱性感染，即不表現臨床癥狀， 但能夠攜帶和傳播病毒，因此，加強對犬流感病毒的檢測與監控十分必要。

流感病毒已被證實可突破種間屏障，感染異種動物。伴隨著我國人口老齡化 時代的到來，寵物犬和貓作為主要的伴侶動物，甚至成為許多家庭的“成員”。 寵物犬對于我國公共衛生管理、生物安全、人類精神生活、生命科學研究和野生 動物保護，都有著特殊的作用和重要影響。雖然目前尚未發現犬流感病毒感染人 類及其他動物，但從理論上說，犬不是沒有可能作為中間宿主傳播犬流感病毒， 一旦在犬群中廣泛流行的H3亞型流感病毒發生變異，獲得感染人的能力，有可 能引起流感病毒在人類的流行。因此，研究犬流感病毒的免疫預防與快速檢測技 術具有十分重要的應用價值。

中國犬群中，H3N2亞型犬流感病毒是主要的流行亞型，尚無有效預防犬流 感的疫苗。對犬流感疫苗研究已取得一些進展。2009年，美國農業部門(USDA) 批準的H3N8亞型犬流感疫苗上市，可有效減少了病毒的傳播。2012年，韓國針 對H3N2犬流感疫苗也已授權。盡管如此，疫苗接種仍有一定的局限性，在幼年、 老年及免疫力低下的犬群中疫苗接種有相當大的風險。

對犬流感治療尚缺乏特異性的藥物，以對癥和對因治療為原則，在發病過程 中犬的免疫力下降，容易引起繼發性細菌感染，對發病早期的犬可用抗病毒藥和 適量的廣譜抗菌藥物，較為嚴重的患犬在此基礎上應進行支持療法，補充能量， 及時使用退燒藥物，避免造成機體內環境紊亂。發病過程中良好的護理也較為重 要，護理得當可有效縮短病犬的感染時間，并獲得持久的免疫力。犬流感的總體 死亡率為1％～5％。