[發明專利]抗茄子青枯病復合微生物菌劑的生產工藝

在審

• 申請號: 201710337309.3
• 申請日: 2017-05-14
• 公開（公告）號: CN107439598A
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發明（設計）人: 熊廷珍
• 申請（專利權）人: 煙臺豐成農業科技有限公司
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01N43/16;A01N25/12;A01P3/00
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技術領域

本發明屬于肥料加工技術領域，具體涉及一種抗茄子青枯病復合微生物菌劑的生產工藝。

背景技術

茄子，茄(學名：Solanum melongena L.)茄科，茄屬植物。茄直立分枝草本至亞灌木，高可達1米，小枝，葉柄及花梗均被 6-8-(10)分枝，平貼或具短柄的星狀絨毛，小枝多為紫色(野生的往往有皮刺)，漸老則毛被逐漸脫落。葉大，卵形至長圓狀卵形，葉柄長約2-4.5厘米(野生的具皮刺)。能孕花單生，花柄長約1-1.8厘米，毛被較密。果的形狀大小變異極大。果的形狀有長或圓，顏色有白、紅、紫等。果可供蔬食。根、莖、葉入藥，為收斂劑，有利尿之效，葉也可以作麻醉劑。種子為消腫藥，也用為刺激劑，但容易引起胃弱及便秘，果生食可解食菌中毒。茄子是我國家常蔬菜的一種，日常種植量很大。茄子青枯病是由細菌引起的，是細菌性維管束組織病害。葉片表現為，初始頂部新葉萎蔫下垂，后下部葉片發展產生凋萎，接下來才是中部葉片產生凋萎，發病后葉片色澤較淡，呈青枯狀。發病初始期植株葉片白天出現萎蔫，傍晚后恢復正常，后很快擴展至整株萎蔫，并不再恢復而死亡；莖表現為，初期為水漬狀斑點擴大后呈褐色，病莖下部表皮粗糙，常產生不定根，剖開病莖，維管束變褐色，橫切后用于擠壓可見乳白色粘液滲出。茄科雷爾氏菌(Ralstonia solanacearum)是引起茄子青枯病的主要病菌，現在，植物青枯病已經成為世界范圍內的傳播廣泛、危害嚴重的重大病害之一。目前，針對茄子青枯病的防治手段主要是提高茄子的抗性，實現耕作控制、藥劑防治和生物防治等，但由于青枯菌長期存活性和寄主范圍多樣性，導致至今尚無有效的化學農藥和其他防治辦法，因此青枯病被稱為植物的“癌癥”。

化學藥劑防治青枯病雖然能起到一定的作用，但是長期大量施用化學藥劑容易造成環境污染和茄子的藥劑殘留，嚴重影響人體健康。生物防治由于其對環境、生態和人畜的安全性而受到了國內外研究者的廣泛關注，其主要是通過施用拮抗菌、有機肥或生物有機肥等措施調節土壤微生態、改善土壤微生物多樣性、抑制病原菌的生長或提高植物自身抗性，從而抑制土傳病害的發生。

殼寡糖是由甲殼素脫乙酰基后經過酶解而得到的低聚糖，可作為植物生長調節劑，增強植物對蟲害的防御能力，已有研究表明殼寡糖對茄子花葉病毒病有誘抗效果。

防治茄子青枯病具有一定的歷史，特別是生物法防治茄子青枯病更是現在研究的熱點所在，如南京農業大學的專利申請號 201010608576.8號專利，能防治茄子青枯病的拮抗菌及其微生物有機肥料，采用自主分離的枯草芽孢桿菌Ⅱ-36添加至有機肥料中，制成生物有機肥來預防茄子青枯病，存在菌種單一，效果不明顯的缺點。再如申請號201510132794.1一種茄子青枯病的抗病藥物公開的抗病配方是由中草藥制備而成，造成中藥資源的浪費。以上專利除將拮抗菌添加至肥料當中復配外，并無添加殼寡糖這一能提高茄子抵抗力的有益成分，并且未經粘涂等生產處理，不能達到長效抗病的效果，本發明則能很好地解決這一問題。本發明利用微生物對青枯病菌的拮抗、殺滅作用及殼寡糖對茄子誘導抗性達到對此病的防治，具有無污染、環境友好、成本低廉、效果持久的優點。

發明內容

本發明的目的在于提供抗茄子青枯病復合微生物菌劑的生產工藝。

本發明的目的是通過如下措施來達到的：

a)膠狀芽孢桿菌菌體制備：購買菌種，制備菌種培養基，配方為蛋白胨1％，牛肉膏0.3％，氯化鈉0.5％，pH7.5,121℃滅菌30min, 接入購買菌種，搖床100～150r/min培養24h，此為菌種液；制備擴增培養基，配方為牛肉膏0.4％、酵母浸出粉0.9％、氯化鈉 0.3％,pH7.5，轉入發酵罐進行高溫滅菌，滅菌后待溫度降低至36℃時，接入5％菌種液，轉速100～150r/min培養24～26h，轉出發酵液4000r/min離心30min，獲得膠狀芽孢桿菌菌體；

b)哈茨木霉菌制備：購買菌種，制備菌種培養基，配方為無瓊脂PDA培養基，25℃接入購買菌種，搖床100～150r/min培養 144h，此為菌種液；制備擴增培養基，配方為蔗糖2％、硝酸銨0.5％、磷酸鈉0.2％、硫酸鎂0.1％，pH9.0，轉入發酵罐進行高溫滅菌，滅菌后待溫度降低至25℃時，接入5％菌種，轉速100～150r/min 培養144～192h，轉出發酵液4000r/min離心30min，獲得哈茨木霉菌菌體；