[發(fā)明專利]抗番茄青枯病復(fù)合微生物菌劑的生產(chǎn)工藝

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710337305.5
• 申請(qǐng)日: 2017-05-14
• 公開（公告）號(hào): CN107857627A
• 公開（公告）日: 2018-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 熊廷珍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 煙臺(tái)豐成農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號(hào): C05G3/00
• 分類號(hào): C05G3/00;C12N1/20;C12N1/14;C12R1/07;C12R1/465;C12R1/885
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于肥料加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗番茄青枯病復(fù)合微生物菌劑的生產(chǎn)工藝。

背景技術(shù)

番茄，即西紅柿(學(xué)名：Lycopersiconesculentum Mill.)，是茄科番茄屬一年生或多年生草本植物，體高0.6-2米，全體生粘質(zhì)腺毛，有強(qiáng)烈氣味，莖易倒伏，葉羽狀復(fù)葉或羽狀深裂，花序總梗長(zhǎng)2-5厘米，常3-7朵花，花萼輻狀，花冠輻狀，漿果扁球狀或近球狀，肉質(zhì)而多汁液，種子黃色，花果期夏秋季，番茄是我國(guó)家常蔬菜的一種，日常種植量很大。番茄青枯病是由細(xì)菌引起的，是細(xì)菌性維管束組織病害。葉片表現(xiàn)為，初始頂部新葉萎蔫下垂，后下部葉片發(fā)展產(chǎn)生凋萎，接下來才是中部葉片產(chǎn)生凋萎，發(fā)病后葉片色澤較淡，呈青枯狀。發(fā)病初始期植株葉片白天出現(xiàn)萎蔫，傍晚后恢復(fù)正常，后很快擴(kuò)展至整株萎蔫，并不再恢復(fù)而死亡；莖表現(xiàn)為，初期為水漬狀斑點(diǎn)擴(kuò)大后呈褐色，病莖下部表皮粗糙，常產(chǎn)生不定根，剖開病莖，維管束變褐色，橫切后用于擠壓可見乳白色粘液滲出。茄科雷爾氏菌(Ralstonia solanacearum)是引起番茄青枯病的主要病菌，現(xiàn)在，植物青枯病已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)的傳播廣泛、危害嚴(yán)重的重大病害之一。目前，針對(duì)番茄青枯病的防治手段主要是提高番茄的抗性，實(shí)現(xiàn)耕作控制、藥劑防治和生物防治等，但由于青枯菌長(zhǎng)期存活性和寄主范圍多樣性，導(dǎo)致至今尚無有效的化學(xué)農(nóng)藥和其他防治辦法，因此青枯病被稱為植物的“癌癥”。

化學(xué)藥劑防治青枯病雖然能起到一定的作用，但是長(zhǎng)期大量施用化學(xué)藥劑容易造成環(huán)境污染和番茄的藥劑殘留，嚴(yán)重影響人體健康。生物防治由于其對(duì)環(huán)境、生態(tài)和人畜的安全性而受到了國(guó)內(nèi)外研究者的廣泛關(guān)注，其主要是通過施用拮抗菌、有機(jī)肥或生物有機(jī)肥等措施調(diào)節(jié)土壤微生態(tài)、改善土壤微生物多樣性、抑制病原菌的生長(zhǎng)或提高植物自身抗性，從而抑制土傳病害的發(fā)生。

殼寡糖是由甲殼素脫乙酰基后經(jīng)過酶解而得到的低聚糖，可作為植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，增強(qiáng)植物對(duì)蟲害的防御能力，已有研究表明殼寡糖對(duì)番茄花葉病毒病有誘抗效果。

防治番茄青枯病具有一定的歷史，如專利申請(qǐng)?zhí)?201610767916.9一種預(yù)防西紅柿青枯病的生物有機(jī)肥及其制備方法，采用芽孢桿菌類和霉菌及熒光假單胞菌類添加至有機(jī)肥料中，制成生物有機(jī)肥來預(yù)防番茄青枯病；再如申請(qǐng)?zhí)?01210004589.3 一種番茄青枯病拮抗菌及其應(yīng)用公開的16srRNA具有SEQ ID No.1 基因序列的蠟狀芽孢桿菌，菌株較為單一；又如申請(qǐng)?zhí)?200910183360.9防除連作番茄青枯病的拮抗菌及其微生物有機(jī)肥料，公開了一株解淀粉芽孢桿菌生產(chǎn)的抗番茄青枯病的生物有機(jī)肥料，亦存在菌株單一的問題。以上專利除將拮抗菌添加至肥料當(dāng)中復(fù)配外，并無添加殼寡糖這一能提高番茄抵抗力的有益成分，并且未經(jīng)粘涂等生產(chǎn)處理，不能達(dá)到長(zhǎng)效抗病的效果，本發(fā)明則能很好地解決這一問題。本發(fā)明利用微生物對(duì)青枯病菌的拮抗、殺滅作用及殼寡糖對(duì)番茄誘導(dǎo)抗性達(dá)到對(duì)此病的防治，具有無污染、環(huán)境友好、成本低廉、效果持久的優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供抗番茄青枯病復(fù)合微生物菌劑的生產(chǎn)工藝。

本發(fā)明的目的是通過如下措施來達(dá)到的：

a)膠狀芽孢桿菌菌體制備：購買菌種，制備菌種培養(yǎng)基，配方為蛋白胨1％，牛肉膏0.3％，氯化鈉0.5％，pH7.5,121℃滅菌30min, 接入購買菌種，搖床100～150r/min培養(yǎng)24h，此為菌種液；制備擴(kuò)增培養(yǎng)基，配方為牛肉膏0.4％、酵母浸出粉0.9％、氯化鈉 0.3％,pH7.5，轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐進(jìn)行高溫滅菌，滅菌后待溫度降低至36℃時(shí)，接入5％菌種液，轉(zhuǎn)速100～150r/min培養(yǎng)24～26h，轉(zhuǎn)出發(fā)酵液4000r/min離心30min，獲得膠狀芽孢桿菌菌體；

b)哈茨木霉菌制備：購買菌種，制備菌種培養(yǎng)基，配方為無瓊脂PDA培養(yǎng)基，25℃接入購買菌種，搖床100～150r/min培養(yǎng) 144h，此為菌種液；制備擴(kuò)增培養(yǎng)基，配方為蔗糖2％、硝酸銨0.5％、磷酸鈉0.2％、硫酸鎂0.1％，pH9.0，轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐進(jìn)行高溫滅菌，滅菌后待溫度降低至25℃時(shí)，接入5％菌種，轉(zhuǎn)速100～150r/min 培養(yǎng)144～192h，轉(zhuǎn)出發(fā)酵液4000r/min離心30min，獲得哈茨木霉菌菌體；